UNG atá íogair ó thaobh teochta
Is é UNG atá íogair ó thaobh teochta (TS-UNG) a fhaightear trí slonn athchuingreach in E. coli.Déanann an einsím catalú ar scaoileadh uracil saor ó DNA aon snáithe agus snáithe dúbailte uracil agus tá sé neamhghníomhach i gcoinne RNA.I gcomparáid leis an einsím traidisiúnta UNG de bhunadh géine E. coli, tá gníomhaíocht níos airde ag einsím TS-UNG ag teochtaí ísle (20 ℃ ~ 37 ℃) agus tá sé íogair ó thaobh teochta agus díghníomhaithe go héasca (50 ℃), ag seachaint díghrádú aimplithe ina bhfuil dUTP táirgí ag teocht an tseomra ag an ngníomhaíocht iarmharach a fhéadfaidh fanacht tar éis díghníomhú na heinsíme traidisiúnta UNG.Mar sin, ní hamháin go bhfuil einsím TS-UNG oiriúnach d'imoibriú um chosc ar éilliú PCR, ach tá sé ag teacht go maith freisin le clár aimplithe RT-PCR agus is féidir é a úsáid in imoibriú um chosc ar éilliú RT-PCR.
Iarratas Molta
Aimpliú Cosc ar Éilliú
Coinníoll Stórála
-20 ° C le haghaidh stórála fadtéarmach, ba chóir é a mheascadh go maith sula n-úsáidfear é, seachain reo-leá go minic.
Maolán stórála
20 mM Tris-HCl (pH 7.5), 100 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, Cobhsaitheoir, 50% Glicearol.
Sainmhíniú ar an Aonad
Is é an méid einsím a theastaíonn chun 1µg de DNA aonshnáithe ina bhfuil bunanna dU a dhíghrádú in 1 uair ag 37°C ná 1 aonad gníomhaíochta (U).
Rialú Cáilíochta
1.Tá íonacht leictreafóiriteach SDS-PAGE níos mó ná 98%
2.Gníomhaíocht díghrádaithe, rialú bhaisc go bhaisc, cobhsaíocht
3.Gan aon ghníomhaíocht nuclease exogenous, gan aon éilliú endonuclease exogenous nó exonuclease.
Treoracha
| Comhpháirteanna | Toirt (μL) | Tiúchan deiridh |
| Maolán 10 × PCR (dNTP saor in aisce, Mg²+saor) | 5 | 1× |
| dUTPanna (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 μM |
| dUTP (ionadaigh dTTP) | - | 200-600 μM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 μL | 1-4 mM |
| 5 U/μL Taq | 0.25 | 1.25 U |
| 1 U/μLTS-UNG | 0.5 (0.1-0.5) | 0.5 U (0.1-0.5U) |
| 25 × Primer Mixa | 2 | 1× |
| Teimpléad | - | ＜1μg/imoibriú |
| ddH₂O | Go dtí 50 | - |
Nóta: a: Má úsáidtear é le haghaidh qPCR/qRT-PCR, ba cheart an taiscéalaí fluaraiseacha a chur isteach sa chóras imoibrithe.De ghnáth, is féidir le tiúchan primer deiridh de 0.2 μM torthaí maithe a thabhairt;nuair a bhíonn an fheidhmíocht imoibrithe bocht, is féidir an tiúchan primer a choigeartú sa raon 0.2-1 μM.De ghnáth, tá an tiúchan probe optamaithe sa raon 0.1-0.3 μM.Is féidir turgnaimh ar ghrádán comhchruinnithe a dhéanamh chun teacht ar an meascán is fearr de phriméir agus de thaiscéalaí.
Nótaí
1.Tá an teocht imoibrithe is fearr d'einsím TS-UNG sách íseal, agus is féidir é a bharrfheabhsú sa raon 20 ℃ ~ 37 ℃, is féidir an dáileog einsím agus an t-am imoibrithe a uasmhéadú sa raon 0.1 ~ 0.5 U, 5 ~ 10 nóim;agus is féidir an einsím a dhíghníomhú sa phróiseas trascríobh droim ar ais.
2.Tá sé oiriúnach do PCR agus RT-PCR chun éilliú a chosc.
3.Seachain reo-leá go minic, agus ná nocht do luaineachtaí móra teochta.
4.Tá éifeachtacht úsáide difriúil dUTP agus íogaireacht d'einsím UNG ag géinte éagsúla atá le aimpliú, dá bhrí sin, má tá laghdú ar íogaireacht braite mar thoradh ar úsáid an chórais UNG, ba cheart an córas imoibrithe a choigeartú agus a bharrfheabhsú, más gá duit tacaíocht theicniúil, déan teagmháil le do thoil. ár gcomhlacht.
