Polymerase DNA Bst 2.0 (saor ó ghliocról)
Díorthaítear Bst DNA polymerase V2 ó Bacillus stearothermophilus DNA Polymerase I, a bhfuil gníomhaíocht DNA polymerase 5′→3′ aige agus gníomhaíocht athsholáthair slabhra láidir, ach gan aon ghníomhaíocht exonuclease 5′→3′.Tá Bst DNA Polymerase V2 thar a bheith oiriúnach do dhíláithriú snáitheanna, LAMP aimplithe isiteirmeach (Aimpliú isiteirmeach trí-Lúb) agus seicheamh tapa.
Comhpháirteanna
| Comhpháirt | HC5005A-01 | HC5005A-02 | HC5005A-03 |
| BstDNApolymerase V2(saor ó ghliocról)(8U/μL) | 0.2 mL | 1 ml | 10 ml |
| 10×HC Bst V2 Maolán | 1.5 mL | 2 × 1.5 mL | 3×10 mL |
| MgSO4(100mM) | 1.5 mL | 2 × 1.5 mL | 2 × 10 mL |
Feidhmchláir
1.LAMP aimpliú isothermal
imoibriú díláithrithe aonair snáithe 2.DNA
Seicheamhú géine 3.High GC
Seicheamh 4.DNA leibhéal na nanogram.
Coinníoll Stórála
Iompar faoi 0 ° C agus a stóráil ag -25 ° C ~ -15 ° C.
Sainmhíniú ar an Aonad
Sainmhínítear aonad amháin mar an méid einsím a ionchorpraíonn 25 nmol de dNTP in ábhar dothuaslagtha aigéid i 30 nóiméad ag 65°C.
Rialú Cáilíochta
1.Measúnacht Íonachta Próitéin (SDS-PAGE):Tá íonacht Bst DNA polymerase V2 ≥99% arna chinneadh ag anailís SDS-PAGE ag baint úsáide as braite Coomassie Blue.
2.Gníomhaíocht Exonuclease:Ní bhíonn aon díghrádú inbhraite mar thoradh goir imoibriú 50 μL ina bhfuil ar a laghad 8 U de Bst DNA polymerase V2 le 1 μg λ -Hind Ⅲ díolama DNA ar feadh 16 uair an chloig ag 37 ℃.
3.Gníomhaíocht Nickase:Ní bhíonn aon díghrádú inbhraite mar thoradh ar gor imoibriú 50 μL ina bhfuil íosmhéid 8 U de Bst DNA polymerase V2 le 1 μg pBR322 DNA ar feadh 16 huaire ag 37°C mar a chinntear.
4.Gníomhaíocht RNase:Ní bhíonn aon díghrádú inbhraite mar thoradh ar gor imoibriú 50 μL ina bhfuil íosmhéid 8 U de Bst DNA polymerase V2 le 1.6 μg MS2 RNA ar feadh 16 huaire ag 37°C mar a chinntear.
5.DNA E. coli:Déantar 120 U de Bst DNA polymerase V2 a scagadh le haghaidh DNA géanómach E. coli a bheith i láthair ag baint úsáide as TaqMan qPCR le primers atá sonrach don lócas rRNA E. coli 16S.Is é an t-éilliú DNA géanómach E. coli ná ≤1 Cóip.
Imoibriú LAMP
| Comhpháirteanna | 25μL |
| 10×HC Bst V2 Maolán | 2.5 μL |
| MgSO4 (100mM) | 1.5 μL |
| dNTPs (10mM an ceann) | 3.5 μL |
| SYTO™ 16 Glas (25×)a | 1.0 μL |
| Meascán primerb | 6 μL |
| Bst DNA Polymerase V2 (saor ó ghliocról) (8 U/uL) | 1 μL |
| Teimpléad | × μL |
| ddH₂O | Suas le 25 μL |
Nótaí:
1) a.SYTOTM 16 Green (25×): De réir riachtanas turgnamhacha, is féidir ruaimeanna eile a úsáid mar ionadaigh;
2) b.Meascán primer: a fhaightear trí mheascadh 20 µ M FIP, 20 µ M BIP, 2.5 µ M F3, 2.5 µ M B3, 5 µ M LF, 5 µ M LB agus méideanna eile.
Frithghníomh agus Coinníoll
1 × HC Bst V2 Maolán, tá an teocht goir idir 60°C agus 65°C.
Díghníomhú Teasa
80 °C, 20 nóiméad
