Próitéináis K (Leacht)
Cat Uimh: HC4502A
Is protease serine cobhsaí é Proteinase K le sainiúlacht leathan substráit.Díghrádaíonn sé go leor próitéiní sa stát dúchais fiú i láthair glantach.Léiríonn fianaise ó staidéir ar struchtúir chriostail agus mhóilíneacha go mbaineann an einsím leis an teaghlach subtilisin le suíomh gníomhach triad catalaíoch (Asp39-A chuid69- Ser224).Is é an príomhshuíomh scoilteachta ná an banna peptide in aice leis an ngrúpa carboxyl d'aimínaigéid alafatacha agus aramatacha le aimínghrúpaí blocáilte.Úsáidtear go coitianta é dá leathansainiúlacht.
Sonraíocht
| Dealramh | Gan dath go leacht donn éadrom |
| Gníomhaíocht | ≥800 U/ml |
| Tiúchan próitéine | ≥20 mg/ml |
| DNA | Níor braitheadh aon cheann |
| RNase | Níor braitheadh aon cheann |
Coinníollacha Stórála
Stóráil ag teocht 2-8 ℃.
Airíonna
| Uimhir CE | 3.4.21.64 (Rcomhcheangailte ón albam Tritirachium) |
| Meáchan móilíneach | 29 kDa (SDS- LEATHANACH) |
| Pointe isealeictreach | 7.81 |
| pH is fearr | 7.0-12.0 Fíor.1 |
| Teocht is fearr | 65 ℃ Fíor.2 |
| cobhsaíocht pH | pH 4.5-12.5 (25 ℃, 16 h) Fíor.3 |
| Cobhsaíocht theirmeach | Faoi bhun 50 ℃ (pH 8.0, 30 nóim) Fig.4 |
| Gníomhaitheoirí | SDS, úiré |
| Coscairí | Fluarafosfáit diisopropyl;fluairíd feinilmethylsulfonyl |
Feidhmchláir
1. Trealamh diagnóiseach géiniteach
2. Feisteáin asbhainte RNA agus DNA
3. Baint comhpháirteanna neamhphróitéine ó fhíocháin, díghrádú neamhíonachtaí próitéine, mar shampla vacsaíní DNA agus ullmhú heparin
4. DNA crómasóim a ullmhú trí leictreafóiréis bhíogach
5. Blot an Iarthair
6. Diagnóis in vitro imoibrithe albaimin glycosylated einsímeacha
Réamhchúraimí
Caith lámhainní cosanta agus gloiní cosanta agus tú ag úsáid nó ag meáchan, agus coinnigh aeráil mhaith tar éis é a úsáid.Féadfaidh an táirge seo a bheith ina chúis le frithghníomhú ailléirgeach craiceann agus greannú súl tromchúiseach.Má dhéantar é a ionanálú, féadfaidh sé a bheith ina chúis le hairíonna ailléirge nó asma nó dyspnea.D'fhéadfadh sé a bheith ina chúis le greannú riospráide.
Measúnacht
Sainmhíniú aonaid
Sainmhínítear aonad amháin (U) mar an méid einsím a theastaíonn chun cáiséin a hidrealú chun 1 μmol tyrosine in aghaidh an nóiméid a tháirgeadh faoi na coinníollacha seo a leanas.
Ullmhúchán imoibrithe
Imoibrí I: tuaslagadh 1g cáiséin bainne i 50ml de thuaslagán fosfáit sóidiam 0.1M (pH 8.0), gortha in uisce 65-70 ℃ ar feadh 15 nóiméad, stir agus tuaslagtha, fuaraithe le huisce, arna choigeartú ag hiodrocsaíd sóidiam go pH8.0, agus seasta toirte 100ml.
Imoibrí II: Tuaslagán TCA: aigéad tríchlóraaicéiteach 0.1M, aicéatáit sóidiam 0.2M, aigéad aicéiteach 0.3M.
Imoibrí III: 0.4M Na2CO3réiteach.
Imoibrí IV: Forint imoibrí caolaithe le huisce íon ar feadh 5 huaire.
Imoibrí V: Caolaitheoir einsím: tuaslagán fosfáit sóidiam 0.1M (pH 8.0).
Imoibrí VI: Tuaslagán tyrosine: 0, 0.005, 0.025, 0.05, 0.075, 0.1, 0.25 umol / ml tyrosine tuaslagtha le 0.2M HCl.
Nós imeachta
1. Déantar 0.5ml d'imoibrí I a réamhthéamh go 37 ℃, cuir 0.5ml de thuaslagán einsíme, measc go maith, agus gor ag 37 ℃ ar feadh 10 nóiméad.
2. Cuir 1ml d'imoibrí II leis chun an t-imoibriú a stopadh, measc go maith, agus lean ar aghaidh leis an gor ar feadh 30 nóiméad.
3. Tuaslagán imoibrithe lártheifneora.
4. Tóg 0.5ml comhshnáthán, cuir imoibrí 2.5ml III, 0.5ml imoibrí IV leis, measc go maith agus gor ag 37 ℃ ar feadh 30 nóiméad.
5. OD660cinneadh mar OD1;grúpa rialaithe bán: úsáidtear imoibrí 0.5ml V chun tuaslagán einsíme a athsholáthar chun OD a chinneadh660mar OD2, OD=OD1-OD2.
6. Cuar caighdeánach L-tyrosine: 0.5mL tiúchan difriúil tuaslagán L-tyrosine, 2.5mL Imoibrí III, 0.5mL Imoibrí IV i 5mL feadán lártheifneoir, gor i 37 ℃ ar feadh 30 nóiméad, a bhrath le haghaidh OD660do thiúchan éagsúil L-tyrosine, fuair ansin an cuar caighdeánach Y=kX+b, áit arb é Y an tiúchan L-tyrosine, is é X OD600.
Ríomh
2: Toirt iomlán an tuaslagáin imoibrithe (mL)
0.5: Toirt an tuaslagáin einsíme (mL)
0.5: Toirt leachta imoibrithe a úsáidtear i gcinneadh crómaigineach (mL)
10: Am freagartha (nóiméad)
Df: caolú iolra
C: tiúchan einsím (mg/mL)
Tagairtí
1. Wieger U & Hilz H. FEBS Lett.(1972);23:77.
2. Wieger U & Hilz H. Biochem.Bithfhis.Res.Cumann.(1971);44:513.
3. Hilz, H.et al.,Eur.J. Bithcheimic.(1975);56:103-108.
4. Sambrook Jet al., Clónáil Mhóilíneach: Lámhleabhar Saotharlainne, 2ú eagrán, Cold Spring Harbour Laboratory Press, Cold Spring Harbour (1989).
Figiúirí
Fig. 1 is fearr pH
Tuaslagán maolánach 100mM: pH6.0-8.0, Na-fosfáit;pH8.0- 9.0, Tris-HCl;pH9.0-12.5, Glycine-NaOH.Tiúchan einsím: 1mg/mL
Fíor 2 An teocht is fearr
Imoibriú i maolán K-fosfáit 20mM pH 8.0.Tiúchan einsím: 1mg/mL
Fíor 3 pH Cobhsaíocht
25 ℃, 16 h-cóireáil le tuaslagán maolánach 50mM: pH 4.5-5.5, Aicéatáit;pH 6.0-8.0, Na-fosfáit;pH 8.0-9.0, Tris-HCl.pH 9.0-12.5, Glycine-NaOH.Tiúchan einsím: 1mg/mL
Fíor 4 Teirmeach cobhsaíocht
Cóireáil 30 min le maolán Tris-HCl 50mM, pH 8.0.Tiúchan einsím: 1mg/mL
Fíor 5 Stóráil stability at 25 ℃
