Superstart qPCR Premix móide-UNG
Uimhir Chait: HCB5071E
Superstart qPCR Is imoibrí speisialaithe é Premix plus-UNG atá deartha le haghaidh imoibrithe cáilíochtúla agus cainníochtúla PCR Fíor-Ama ag baint úsáide as braite bunaithe ar probe, a forbraíodh go sonrach le haghaidh próisis lyophilization.Tá einsím nua-thosaithe te Hotstart Taq plus (DG) ann, a bhfuil a ghníomhaíocht einsím Taq séalaithe ag teocht an tseomra, a chuireann cosc go héifeachtach ar aimpliú neamhshonrach de bharr annealing neamhshonrach primer nó foirmiú primer dimer faoi choinníollacha teochta íseal, rud a chuireann feabhas ar an aimpliú neamhshonrach. sainiúlacht an imoibrithe aimpliúcháin.Úsáideann an t-imoibrí seo maolán sainiúil qPCR optamaithe agus córas frith-éillithe UNG/dUTP chun tosú te tapa a bhaint amach, rud a chuireann go mór le héifeachtúlacht agus íogaireacht imoibrithe qPCR.Is féidir leis cuair chaighdeán maith a fháil i raon leathan réimsí cainníochta agus cainníochtú a dhéanamh go cruinn, rud a chosc go héifeachtach aimpliú dearfach bréagach de bharr táirgí PCR iarmharacha nó éilliú aerasóil.Tá an t-imoibrí seo ag luí leis an gcuid is mó d'ionstraimí cainníochtúla PCR fluaraiseacha ó mhonaróirí ar nós Applied Biosystems, Eppendorf, Bio- Rad agus Roche etc., agus taispeánann sé cobhsaíocht mhaith i bhfoirm lyophilized.
Comhdhéanamh imoibrí
1. 5×HotstartPremix móide-UNG (Mg2+in aisce) (DG)
2. MgCl 250 mM2
3. 4 × lyoprotectant (roghnach)
Coinníollacha Stórála
Stóráil fhadtéarmach ag -20 ℃;is féidir é a stóráil ag 4 ℃ ar feadh suas le 3 mhí.Measc go maith roimh úsáid agusseachain reo agus leá arís agus arís eile.
Prótacal Rothaíochta
| Nós imeachta | Teocht. | Am | Rothaíocht |
| Díleá | 50 ℃ | 2 nóim | 1 |
| Gníomhachtaithe polaiméire | 95 ℃ | 1 ~ 5 nóiméad | 1 |
| Denature | 95 ℃ | 10~20 s | 40-50 |
| Annealing agus Síneadh | 56 ~ 64 ℃ | 20~60 s | 40-50 |
qPCR Imoibriú Leachtach SyUllmhú gas
|
Comhdhéanamh |
Toirt 25µL |
Toirt 50µL |
Tiúchan Deiridh |
| 5×HotstartPremix móide-UNG(Mg2+in aisce) (DG) | 5µL | 10µL | 1× |
| MgCl 250mM2 | 0.45µL | 0.9µL | 4.5 mM |
| 4×lyoprotectant1 | 6.25µL | 12.5µL | 1× |
| 25×Primer-Probe Meascán2 | 1µL | 2µL | 1× |
| DNA teimpléad3 | —— | —— | —— |
| ddH2O | Go dtí 25µL | Go 50µL | —— |
1. De ghnáth tugann tiúchan deiridh de 0.2μM le haghaidh primers torthaí maithe;nuair a bhíonn feidhmíocht imoibrithe bocht, coigeartaigh an tiúchan primer laistigh den raon 0.2-1μM de réir mar is gá.Go hiondúil déantar tiúchan an taiscéalaí a optamú laistigh den raon 0.1-0.3μM trí thurgnaimh ghrádáin chun na teaglamaí optamacha a aimsiú.
2. Athraíonn líon cóip na spriocghéin atá i gcineálacha éagsúla teimpléad;más gá, is féidir caolú grádán a dhéanamh chun an méid breise teimpléid is fearr a chinneadh.
3. Is féidir an córas seo a lyophilized;nuair a úsáideann custaiméirí an córas seo gan riachtanais reo-thriomú, is féidir 4 × lyoprotectant a chur leis go roghnach; má tá gá le táirgí reoite-triomaithe, le linn bailíochtú feidhmíochta táirge céim imoibrithe leachtacha, caithfidh sé 4 × lyoprotectant a chur leis chun comhsheasmhacht le comhpháirteanna an chórais lyophilized a chinntiú. agus éifeachtaí.
Nuair a úsáidtear an córasd le haghaidh reo-thriomú, ullmhaigh an córas as seo a leanas:
| Comhdhéanamh | 25µL Córas Imoibrithe |
| 5 × HotstartPremix móide-UNG (Mg2+in aisce) (DG) | 5µL |
| MgCl 250mM2 | 0.45µL |
| 4×lyoprotectant | 6.25µL |
| 25×Primer-Probe Meascán | 1µL |
| ddH2O | Go 18~20µL |
* Más gá córais eile do reo-thriomú, déan teagmháil ar leithligh le do thoil.
Próiseas Lyophilizationss
| Nós imeachta | Teocht. | Am | Coinníoll | Brú |
| Réamh-reo | 4 ℃ | 30 nóim | Coinnigh |
1 atm |
| -50 ℃ | 60 nóim | Fuarú | ||
| -50 ℃ | 180 nóim | Coinnigh | ||
| Triomú Bunscoile | -30 ℃ | 60 nóim | Téamh |
Fholúis deiridh |
| -30 ℃ | 70 nóim | Coinnigh | ||
| Triomú Tánaisteach | 25 ℃ | 60 nóim | Téamh |
Fholúis deiridh |
| 25 ℃ | 300 nóim | Coinnigh |
2. Tá an próiseas lyophilization thuas le haghaidh tagartha amháin.Tá paraiméadair éagsúla ag cineálacha éagsúla táirgí agus triomadóirí reoite éagsúla, agus mar sin is féidir coigeartuithe a dhéanamh de réir iarbhírcoinníollacha le linn úsáide.
3. Féadfaidh próisis lyophilization éagsúla a bheith oiriúnach do mhéideanna éagsúla bhaisc lyophilizedtáirgí, mar sin ní mór bailíochtú tástála leordhóthanach a dhéanamh nuair a úsáidtear é le haghaidh táirgeadh ar mhórscála.
Treoracha le haghaidh úsáid lyophilized púdar
1. Lártheifneoir go hachomair ar an púdar lyophilized;
2. Cuir teimpléad aigéad núicléach leis an púdar lyophilized agus cuir uisce suas go dtí 25µL;
3. Measc go maith trí lártheifneoiriú agus reáchtáil ar an meaisín.
Rialú Cáilíochta:
1. Tástáil fheidhmiúil: íogaireacht, sainiúlacht, atáirgtheacht qPCR.
2. Gan aon ghníomhaíocht núicléasáis eisghinteach, gan aon éilliú exogenous endo/exonuclease.
Eolas Teicniúil:
1. Superstart qPCR Úsáideann Premix móide-UNG einsím nua-thosaithe te a chuireann ar chumas tosú te tapa laistigh de 1 ~ 5 nóiméad;trí fhoirmiú maolánach speisialta tá sé oiriúnach d'imoibrithe PCR cainníochtúla fluaraiseacha ilphléacs.
2. Tá sainiúlacht níos airde aige a fheabhsaíonn go mór íogaireacht braite teorainn chainníochtúil PCR fluaraiseachta, ag déanamh normalú cuair aimplithe, luach fluaraiseachta a fháil feabhsú soiléir ag teimpléid tiúchan íseal, oiriúnach mar imoibrithe braite PCR cainníochtúla fluaraiseachta ard-íogaireachta.
3. Le haghaidh primers le teocht annealing níos ísle nó níos faide ná blúirí 200bp, moltar modh 3-chéim.
4. Tá éifeachtúlacht úsáide duTP agus íogaireacht d'einsím UNG difriúil do spriocghéinte éagsúla, mar sin má laghdaítear íogaireacht braite le húsáid an chórais UNG, ba cheart an córas imoibrithe a choigeartú agus a bharrfheabhsú.Má tá gá le tacaíocht theicniúil déan teagmháil lenár gcuideachta.
5. Úsáid limistéir agus pípéid tiomnaithe roimh aimpliú agus dá éis, lámhainní a chaitheamh le linn oibriú agus cuir in ionad iad go minic;ná oscail an feadán imoibrithe tar éis críochnú PCR chun éilliú samplaí ag táirgí PCR a íoslaghdú.
