Hotstart Taq DNA Polymerase
Is éard atá i Hot Start Taq DNA Polymerase (modhnú antashubstainte) ná polaiméaráis te-thosaithe teirmeastáblaí DNA ó Thermus aquaticus YT-1, a bhfuil gníomhaíocht pholaiméiráis 5′→3′ aige agus gníomhaíocht endonuclease flap 5'.Is polaiméaráis Taq DNA é an polaiméaráis Taq DNA te-túsaithe a mhodhnaítear le hantasubstaintí teirmeachabile Taq.Mhéadaigh modhnú antasubstainte sainiúlacht, íogaireacht, agus toradh PCR.
Comhpháirteanna
| Comhpháirt | HC1012A-01 | HC1012A-02 | HC1012A-03 | HC1012A-04 |
| 5×HC Taq Maolán | 4 × 1 mL | 4×10 mL | 4×50 mL | 5×400 mL |
| Hot Start Taq DNA Polymerase (Antashubstaint modhnaithe) (5 U/μL) | 0.1 mL | 1 ml | 5 ml | 10×5 mL |
Feidhmchláir
10 mM Tris-HCl (pH 7.4 ag 25 ℃), 100 mM KCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM dithiothreitol, 0.5% Tween20, 0.5% IGEPALCA-630 agus 50% Glycerol.
Coinníoll Stórála
Iompar faoi 0 ° C agus a stóráil ag -25 ° C ~ -15 ° C.
Sainmhíniú ar an Aonad
Sainmhínítear aonad amháin mar an méid einsím a ionchorpraíonn 15 nmol de dNTP in ábhar dothuaslagtha aigéid i 30 nóiméad ag 75°C.
Rialú Cáilíochta
1.EndGníomhaíocht onuclease:Mar thoradh ar gor 20 U d'einsím le 4 μg pUC19 DNA ar feadh 4 uair an chloig ag 37 ℃ níor tháinig aon díghrádú inbhraite ar an DNA mar a chinntear le leictreafóiréis glóthach.
2.5 kb Lambda PCR:Mar thoradh ar 25 timthriall de aimpliú PCR de 5 ng Lambda DNA le 1.25 aonad de Taq DNA Polymerase i láthair 200 µM dNTP agus 0.2 µM primers sa táirge 5 kb ionchasach.
3.Gníomhaíocht Exonuclease:Ní bhíonn aon díghrádú inbhraite mar thoradh ar gor imoibriú 50 µl ina bhfuil íosmhéid 12.5 U de Taq DNA Polymerase le oligonucleotide 10 nmol 5’-FAM ar feadh 30 nóiméad ag 37 ℃.
4.Gníomhaíocht RNase:Mar thoradh ar gor imoibriú 10 µL ina raibh 20 U d’einsím le 1μg de thrascríbhinní RNA ar feadh 2 uair ag 37°C níor tharla aon díghrádú inbhraite ar an RNA mar a chinntear le leictreafóiréis glóthach.
5.Díghníomhú Teasa:Níl.
Córas Imoibrithe
| Comhpháirteanna | Toirt |
| DNA teimpléada | roghnach |
| 10 μM Ar Aghaidh Primer | 0.5 μL |
| 10 μM Droim ar ais Primer | 0.5 μL |
| Meascán dNTP (10mM an ceann) | 0.5 μL |
| 5×HC Taq Maolán | 5 μL |
| Polaiméaráis DNA Taqb(5U/μL) | 0.125 μL |
| Uisce saor ó núicléas | Suas le 25 μL |
Nótaí:
1) a.
| DNA | Méid |
| Géanómach | 1 ng-1 μg |
| Plasmid nó víreasach | 1 lch-1 ng |
2) b.Féadfaidh an tiúchan is fearr de Taq DNA Polymerase a bheith idir 5-50 aonad/mL (0.1-0.5 aonad/25 µL imoibriú) i bhfeidhmchláir speisialaithe.
Prótacal rothaíochta teirmeach
PCR
| Céim | Teocht(°C) | Am | Timthriallta |
| Dínádúrú tosaigha | 95 ℃ | 1-3 nóiméad | - |
| Dínádúrú | 95 ℃ | 15-30 s | 30-35 Timthriall |
| Annealingb | 45-68 ℃ | 15-60 s | |
| Síneadh | 68 ℃ | 1kb/nóiméad | |
| Síneadh Deiridh | 68 ℃ | 5 nóiméad | - |
Nótaí:
1) Is leor dínádúrú tosaigh 1 nóiméad ag 95°C d’fhormhór na n-aimplithe.Le haghaidh teimpléid dheacra, moltar dínádúrú níos faide de 2-3 nóiméad ag 95 °C.Le PCR an choilíneachta, moltar dínádúrú 5 nóiméad tosaigh ag 95°C.
2) Is é an chéim annealing de ghnáth 15-60 s.Tá an teocht annealing bunaithe ar Tm an phéire primer agus de ghnáth 45-68 ℃.
