Premix Uilíoch SYBR GREEN qPCR (Gorm)
Uimhir Chait: HCB5041B
Is réamhréiteach é Uilíoch Blue qPCR Master Mix (Dye Based) le haghaidh aimpliú PCR cainníochtúil 2 × fíor-ama arb iad is sainairíonna íogaireacht ard agus sainiúlacht é, dath gorm, agus tá éifeacht aige rianaithe samplála breise.Úsáideann an croí-chomhpháirt Taq DNA polymerase tús te antashubstainte chun cosc a chur go héifeachtach ar aimpliú neamhshonrach mar gheall ar anáil primer le linn ullmhú samplaí.Ag an am céanna, cuireann an fhoirmle na fachtóirí cur chun cinn chun feabhas a chur ar éifeachtúlacht aimplithe imoibrithe PCR agus aimpliú géinte a chomhionannú le hábhair éagsúla GC (30 ~ 70%), ionas gur féidir le PCR cainníochtúil caidreamh líneach maith a fháil i raon leathan cainníochtúil. réigiún.Tá dath Tagartha Éighníomhach ROX speisialta sa táirge seo, atá infheidhme maidir le formhór na n-ionstraimí qPCR.Ní gá an tiúchan ROX ar ionstraimí éagsúla a choigeartú.Ní gá ach primers agus teimpléid a chur leis chun an córas imoibrithe a ullmhú le haghaidh aimplithe.
Comhpháirteanna
Meascán Máistir qPCR Uilíoch Gorm
Coinníollacha stórála
Seoltar an táirge le pacaí oighir agus is féidir é a stóráil ag -25 ℃ ~ -15 ℃ ar feadh 18 mí.Is gá ionradaíocht láidir éadrom a sheachaint nuair a bhíonn an córas imoibrithe á stóráil nó á ullmhú.
Sonraíocht
Tiúchan | 2× |
Modh braite | SYBR |
Modh PCR | qPCR |
Polaiméaráis | Taq DNA polaiméire |
Cineál sampla | DNA |
Trealamh iarratais | An chuid is mó ionstraimí qPCR |
Cineál táirge | Réamh-mheascán SYBR do PCR cainníochtúla fluaraiseachta fíor-ama |
Déan iarratas chuig (iarratas) | Léiriú Géine |
Treoracha
Córas 1.Reaction
Comhpháirteanna | Volome(μL) | Volome(μL) | Tiúchan Deiridh |
Uilíoch SYBR GREEN qPCR Premix | 25 | 10 | 1× |
Ar Aghaidh Primer (10μmol/L) | 1 | 0.4 | 0.2 μmol/L |
Cúil tosaigh (10μmol/L) | 1 | 0.4 | 0.2 μmol/L |
DNA | X | X | |
ddH2O | suas le 50 | suas le 20 | - |
[Nóta]: Measc go maith sula n-úsáidtear é chun boilgeoga iomarcacha a sheachaint ó chroitheadh go bríomhar.
a) Tiúchan primer: Is é an tiúchan deiridh primer ná 0.2μmol/L, agus is féidir é a choigeartú freisin idir 0.1 agus 1.0μmol/L de réir mar is cuí.
b) Tiúchan an teimpléid: Más réiteach stoc cDNA neamhchaolaithe é an teimpléad, níor cheart go mbeadh an toirt a úsáidtear níos mó ná 1/10 de thoirt iomlán an imoibrithe qPCR.
c) Caolú teimpléid: Moltar an tuaslagán stoc cDNA a chaolú 5-10 uair.Is fearr an méid teimpléid is fearr a chuirtear leis nuair is é an luach Ct a fhaightear trí aimpliú ná 20-30 timthriall.
d) Córas imoibrithe: Moltar 20μL nó 50μL a úsáid chun éifeachtacht agus atrialltacht an aimplithe géine sprice a chinntiú.
e) Ullmhúchán córais: Ullmhaigh le do thoil sa bhinse sárghlan agus bain úsáid as na leideanna agus na feadáin imoibrithe gan iarmhar núicléas;moltar na leideanna a úsáid le cartúis scagaire.Seachain tras-éilliú agus éilliú aerasóil.
2.Clár imoibrithe
Clár Caighdeánach
Céim rothaíochta | Teocht. | Am | Timthriallta |
Dínádúrú tosaigh | 95 ℃ | 2 nóim | 1 |
Dínádúrú | 95 ℃ | 10 soic | 40 |
Annealing/Síneadh | 60 ℃ | 30 soicind★ | |
Céim cuar leá | Réamhshocrú Ionstraim | 1 |
Clár Tapa
Céim rothaíochta | Teocht. | Am | Timthriallta |
Dínádúrú tosaigh | 95 ℃ | 30 soic | 1 |
Dínádúrú | 95 ℃ | 3 soic | 40 |
Annealing/Síneadh | 60 ℃ | 20 soicind★ | |
Céim cuar leá | Réamhshocrú Ionstraim | 1 |
[Nóta]: Tá an clár tapa oiriúnach do fhormhór mór na ngéinte, agus is féidir cláir chaighdeánacha a thriail le haghaidh géinte struchtúr tánaisteach casta aonair.
a) Teocht agus am análaithe: Coigeartaigh le do thoil de réir fad na primer agus an spriocghéine.
b) Fáil comhartha fluaraiseachta (★): Socraigh an nós imeachta turgnamhach de réir na gceanglas sna treoracha úsáide don ionstraim.
c) Cuar leá: Is féidir an clár réamhshocraithe ionstraim a úsáid de ghnáth.
3. Anailís Thorthaí
Bhí íosmhéid de thrí mhacasamhlú bitheolaíochta ag teastáil le haghaidh turgnaimh chainníochtúla.Tar éis an imoibrithe, is gá an cuar aimpliúcháin agus an cuar leá a dhearbhú.
3.1 Cuar aimpliúcháin:
Tá an cuar aimpliúcháin caighdeánach S-chruthach.Tá anailís chainníochtúil is cruinne nuair a thiteann luach Ct idir 20 agus 30. Má tá luach Ct níos lú ná 10, is gá an teimpléad a chaolú agus an tástáil a dhéanamh arís.Nuair a bhíonn an luach Ct idir 30-35, is gá an tiúchan teimpléad nó méid an chórais imoibrithe a mhéadú, ionas go bhfeabhsófar an éifeachtúlacht aimpliúcháin agus go n-áiritheofar cruinneas anailíse toraidh.Nuair a bhíonn an luach Ct níos mó ná 35, ní féidir leis na torthaí tástála anailís chainníochtúil a dhéanamh ar léiriú na géine, ach is féidir iad a úsáid le haghaidh anailíse cáilíochtúil.
3.2 Cuar leá:
Léiríonn buaic aonair an chuar leá go bhfuil sainiúlacht an imoibrithe go maith agus is féidir anailís chainníochtúil a dhéanamh;má léiríonn an cuar leá buaiceanna dúbailte nó iolracha, ní féidir anailís chainníochtúil a dhéanamh.Léiríonn an cuar leá beanna dúbailte, agus is gá a mheas an bhfuil an buaic neamh-sprioc ná primer dimer nó aimpliú neamh-shonrach ag leictreafóiréis glóthach agarose DNA.Más dimer primer é, moltar an tiúchan primer a laghdú nó na primers a athdhearadh le héifeachtacht aimpliúcháin ard.Más aimpliú neamhshonrach é, le do thoil cuir leis an teocht annealaithe, nó athdhear na priméirí go sainiúlacht.
Nótaí
Caith an TCP riachtanach, a leithéid de chóta saotharlainne agus lámhainní, le do shláinte agus do shábháilteacht a chinntiú!
Tá an táirge seo le húsáid taighde AMHÁIN!