Polaiméaráis DNA Fiáin Taq
Is polaiméaráis DNA teirmeastatach é Taq DNA Polymerase ó Thermus aquaticus YT-1, a bhfuil gníomhaíocht pholaiméiráis 5′→3′ aige agus gníomhaíocht endonucleáis flap 5’.
Comhpháirteanna
| Comhpháirt | HC1010A-01 | HC1010A-02 | HC1010A-03 | HC1010A-04 |
| 10 × Maolán Taq | 2 × 1 mL | 2 × 10 mL | 2 × 50 mL | 5×200 mL |
| Polaiméaráis DNA Taq (5 U/μL) | 0.1 mL | 1 ml | 5 ml | 5×10 mL |
Coinníoll Stórála
Iompar faoi 0 ° C agus a stóráil ag -25 ° C ~ -15 ° C.
Sainmhíniú ar an Aonad
Sainmhínítear aonad amháin mar an méid einsím a ionchorpraíonn 15 nmol de dNTP in ábhar dothuaslagtha aigéid i 30 nóiméad ag 75°C.
Rialú Cáilíochta
1.Measúnacht Íonachta Próitéin (SDS-PAGE):Ba é íonacht Taq DNA polymerase ná ≥95% arna chinneadh ag anailís SDS-PAGE.
2.EndGníomhaíocht onuclease:Mar thoradh ar a laghad 5 U de Taq DNA polymerase le 1 μg λDNA ar feadh 16 uair an chloig ag 37 ℃ níl aon díghrádú inbhraite mar a chinntear.
3.Gníomhaíocht Exonuclease:Mar thoradh ar a laghad 5 U de Taq DNA polymerase le 1 μg λ -Hind Ⅲ díolama DNA ar feadh 16 uair an chloig ag 37 ℃ níl aon díghrádú inbhraite mar a chinntear.
4.Gníomhaíocht Nickase:Ní bhíonn aon díghrádú inbhraite mar thoradh ar íosmhéid 5 U de pholaiméiráis DNA Taq le 1 μg pBR322 DNA ar feadh 16 huaire ag 37°C mar a chinntear.
5.Gníomhaíocht RNase:Ní bhíonn aon díghrádú inbhraite mar thoradh ar íosmhéid 5 U de pholaiméiráis DNA Taq le 1.6 μg MS2 RNA ar feadh 16 uair an chloig ag 37°C mar a chinntear.
6.E. coliDNA:Déantar 5 U de Taq DNA polymerase a scagadh le haghaidh láithreacht DNA géanómaigh E. coli ag baint úsáide as TaqMan qPCR le primers atá sonrach don lócas rRNA E. coli 16S.Is é an t-éilliú DNA géanómach E. coli ná ≤1 Cóip.
7.Aimpliú PCR (5.0 kb Lambda DNA)- Mar thoradh ar imoibriú 50 µL ina bhfuil 5 ng Lambda DNA agus 5 aonad de Taq DNA Polymerase ar feadh 25 thimthriall d’aimpliú PCR, is é an toradh a bhfuiltear ag súil leis ná 5.0 kb.
Socrú Imoibrithe
| Comhpháirteanna | Toirt |
| DNA teimpléada | roghnach |
| 10 μM Ar Aghaidh Primer | 1 μL |
| 10 μM Droim ar ais Primer | 1 μL |
| Meascán dNTP (10mM an ceann) | 1 μL |
| 10×Taq Maolán | 5 μL |
| Polaiméaráis DNA Taqb | 0.25 μL |
| Uisce saor ó núicléas | Suas le 50 μL |
Nótaí:
1) Tá an tiúchan imoibrithe is fearr de theimpléid éagsúla difriúil.Taispeánann an tábla seo a leanas an teimpléad a mholtar a úsáid don chóras imoibrithe 50 µL.
| DNA | Méid |
| Géanómach | 1 ng-1 μg |
| Plasmid nó víreasach | 1 lch-1 ng |
2) Féadfaidh an tiúchan is fearr de Taq DNA Polymerase a bheith idir 0.25 µL ~ 1 µL in feidhmeanna speisialaithe.
ImoibriúClár
| Céim | Teocht(°C) | Am | Timthriallta |
| Dínádúrú tosaigha | 95 ℃ | 5 nóiméad | - |
| Dínádúrú | 95 ℃ | 15-30 s | 30-35 Timthriall |
| Annealingb | 60 ℃ | 15 s | |
| Síneadh | 72 ℃ | 1kb/nóiméad | |
| Síneadh Deiridh | 72 ℃ | 5 nóiméad | - |
Nótaí:
1) Tá an coinníoll dínádúraithe tosaigh oiriúnach don chuid is mó d'imoibrithe aimpliúcháin agus is féidir é a mhodhnú de réir chastacht an struchtúir teimpléid.Má tá struchtúr an teimpléid casta, is féidir an t-am réamh-dínádúraithe a leathnú go 5 - 10 nóiméad chun an éifeacht dínádúraithe tosaigh a fheabhsú.
2) Is gá an teocht annealing a choigeartú de réir luach Tm an primer, atá socraithe go ginearálta go 3 ~ 5 ℃ níos ísle ná luach Tm an primer;Le haghaidh teimpléid casta, is gá an teocht annealing a choigeartú agus am síneadh a leathnú chun aimpliú éifeachtach a bhaint amach.
