Próitéináis K NGS (púdar)

Sonraíocht

Airíonna

Sainmhíniú aonaid

Sainmhínítear aonad amháin de NGS Protease K mar an méid einsím a theastaíonn chun cáiséin a hidrealú isteach i 1 μmol L-tyrosine faoi choinníollacha cinnteoireachta caighdeánach.

 Ullmhúchán imoibrithe

Imoibrí I:

Foshraith: Cáiséin 1% ó thuaslagán bainne bó: tuaslaig 1g cáiséin bainne bó i 50ml de thuaslagán fosfáit sóidiam 0.1M, pH 8.0, teas i ndabhach uisce ag 65-70 °C ar feadh 15 nóiméad, corraigh agus tuaslagtha, fuaraigh le huisce, coigeartaithe ag hiodrocsaíd sóidiam go pH 8.0, agus caolaigh go 100ml.

Imoibrí II:

Tuaslagán TCA: aigéad trichloroacetic 0.1M, aicéatáit sóidiam 0.2M agus aigéad aicéiteach 0.3M (meáigh 1.64g aigéad trichloroacetic + 1.64g aicéatáit sóidiam + 1.724mL aigéad aicéiteach as a chéile, cuir 50mL aicéatáit dí-ianaithe, a choigeartú le HCl go pH 4. 100ml).

Imoibrí III:

Tuaslagán de charbónáit sóidiam 0.4m (meáigh 4.24g de charbónáit sóidiam ainhidriúil agus tuaslagtha in uisce 100mL)

Imoibrí IV:

Imoibrí feanól Fóil: caolaigh 5 huaire le huisce dí-ianaithe.

Imoibrí V:

Caolaitheoir einsím: tuaslagán fosfáit sóidiam 0.1 M, pH 8.0.

Imoibrí VI:

Tuaslagán caighdeánach L-tyrosine: 0, 0.005, 0.025, 0.05, 0.075, 0.1, 0.25 umol / ml L-tyrosine tuaslagtha le 0.2M HCl.

Nós imeachta

1. Cas ar an speictreafótaiméadar UV-Vis agus roghnaigh tomhas fótaiméadrach.

2. Socraigh an tonnfhad mar 660nm.

3. Cas ar an dabhach uisce, socraigh an teocht go 37 ℃, cinntigh an teocht gan athrú ar feadh 3-5 nóiméad.

4. Déan tsubstráit 0.5mL a réamhthéamh i bhfeadán lártheifneora 2ml ag dabhach uisce 37 ℃ ar feadh 10 nóiméad.

5. Sliocht tuaslagán einsím caolaithe 0.5mL isteach sa fheadán lártheifneoir réamhthéite ar feadh 10 nóiméad.Socraigh caolaitheoir einsíme mar ghrúpa bán.

6. Cuir 1.0 mL imoibrí TCA leis díreach tar éis an imoibrithe.Measc go maith agus gor i ndabhach uisce ar feadh 30 nóiméad.