Rnase Inhibitor
Is inhibitor murine RNase inhibitor RNase murine athchuingreach sainráite agus íonaithe ó E.coli.Ceanglaíonn sé le RNase A, B nó C i gcóimheas 1:1 trí nascáil neamhchomhfhiúsach, rud a chuireann bac ar ghníomhaíocht na dtrí einsím agus ag cosaint RNA ó dhíghrádú.Mar sin féin, Níl sé éifeachtach i gcoinne RNase 1, RNase T1, S1 Nuclease, RNase H nó RNase ó Aspergillus.Rinne RT-PCR, RT-qPCR agus IVT mRNA an t-inhibitor RNase Murine a thástáil, agus bhí sé ag luí le tras-scríbhinní éagsúla droim ar ais, polaiméirí DNA agus polaiméirí RNA.
I gcomparáid le coscairí RNase daonna, níl dhá chistéin in inhibitor RNase murine atá an-íogair d'ocsaídiú rud a fhágann díghníomhú an choscóra.Sin a fhágann go bhfuil sé cobhsaí ag tiúchan íseal DTT (níos lú ná 1 mM).Fágann an ghné seo go bhfuil sé oiriúnach le húsáid in imoibrithe ina bhfuil comhchruinnithe arda DTT díobhálach don imoibriú (eg RT-PCR fíor-ama).
Aiarratas
Is féidir an táirge seo a úsáid go forleathan in aon turgnamh ina bhfuil cur isteach RNase indéanta chun díghrádú RNA a sheachaint, mar shampla:
1.Sintéis den chéad snáithe de cDNA, RT-PCR, RT-qPCR, etc.
2.Cosnaíonn RNA RNA ó dhíghrádú le linn trascríobh/aistriúcháin in vitro (m.sh., córas macasamhlú víreasach in vitro).
3.Cosc ar ghníomhaíocht RNase le linn scaradh agus íonú RNA.
Coinníollacha Stórála
Is féidir an táirge a stóráil ag -25 ～- 15 ℃, bailí ar feadh 2 bhliain.
Maolán stórála
50 mM KCl, 20 mM HEPES-KOH (pH 7.6, 25 ℃), 8 mM DTT agus 50% gliocról.
Sainmhíniú aonaid
Sainmhíníodh an méid inhibitor RNase murine a theastaíonn chun gníomhaíocht 5ng de ribonuclease A a chosc faoi 50% mar aonad amháin (U).
meáchan móilíneach próitéine
Is é meáchan móilíneach an inhibitor RNase murine ná 50 kDa.
Rialú cáilíochta
Exonuclease Gníomhaíocht:
Ní thugann 40 U d'inhibitor RNase murine le 1 μg λ -Hind III díleá DNA ag 37 ℃ ar feadh 16 uair an chloig aon díghrádú mar a chinntear le leictreafóiréis glóthach agarose.
Gníomhaíocht Endonuclease:
Ní thugann 40 U d'inhibitor RNase murine le 1μ g λ DNA ag 37 ℃ ar feadh 16 uair an chloig aon díghrádú mar a chinntear le leictreafóiréis glóthach agarose.
Ag cnagadh Gníomhaíocht:
Ní thugann 40U d'inhibitor murine RNase le 1μ g pBR322 ag 37 ℃ ar feadh 16 uair an chloig aon díghrádú mar a chinntear le leictreafóiréis glóthach agarose.
RNase Gníomhaíocht:
Ní thugann 40U d'inhibitor RNase murine le 1.6μ g MS2 RNA ar feadh 4h ag 37 ℃ aon díghrádú mar a chinntear le leictreafóiréis glóthach agarose.
E.DNA coli:
Déantar scagadh ar 40 U d'inhibitor RNase murine le haghaidh DNA géanómaíochta E. coli a bheith i láthair ag baint úsáide as TaqMan qPCR le primers a bhaineann go sonrach leis an lócas rRNA E. coli 16S.Is é an t-éilliú DNA géanómach E. coli ná ≤ 0.1 pg/40 U.
Nótas
Beidh díghníomhú einsíme mar thoradh ar ascalaithe nó corraigh 1.Violent.
2. Ba é an raon teochta is fearr de seo an t-inhibitor 25-55 ℃, agus díghníomhaíodh é ag 65 ℃ agus níos airde.
3.Níor chuir coscaire murine RNase bac ar ghníomhaíochtaí RNase H, RNase 1 agus RNase T1.
4. Fuarthas go raibh cosc ar ghníomhaíocht RNase i raon leathan pH (bhí pH 5-9 go léir gníomhach), agus breathnaíodh an ghníomhaíocht is airde ag pH 7-8.
5. Ós rud é go gcoinníonn ribonucleases gníomhaíocht de ghnáth faoi choinníollacha dínádúraithe, ní mór cúram a ghlacadh chun dínádúrú móilíní RNase Inhibitor a bhfuil coimpléisc acu le ribonuclease a sheachaint.Chun scaoileadh ribonuclease gníomhach a chosc, ba cheart teocht níos airde ná 50 ° C agus tiúchan ard úiré nó gníomhairí dínádúraithe eile a sheachaint.
