Kit Mini Eastóscadh DNA
Glacann an trealamh seo córas maolánach optamaithe agus teicneolaíocht íonú colún glóthach shilice, ar féidir léi blúirí DNA 70 bp - 20 kb a aisghabháil ó thiúchan éagsúla glóthach agarose TAE nó TBE.Is féidir le colún asaithe DNA DNA a asú go speisialta faoi riocht ard-salann.Ina theannta sin, is féidir leis an trealamh blúirí DNA ó tháirgí PCR, córais imoibrithe einsímeacha nó táirgí amh DNA a fhaightear trí mhodhanna eile a íonú go díreach, agus neamhíonachtaí cosúil le próitéiní, comhdhúile orgánacha eile, iain salainn neamhorgánacha agus primers oligonucleotide a bhaint.Is féidir leis a chinntiú go bhféadfar an íonú a chríochnú laistigh de 10-15min.Is féidir an DNA íonaithe a úsáid go díreach le haghaidh ligation, claochlú, díleá einsímí, trascríobh in vitro, PCR, seicheamhú, microinstealladh, etc.
Coinníollacha stórála
Stóráil ag -15 ~ -25 ℃ agus iompar ag teocht an tseomra.
Comhpháirteanna
| Comhpháirteanna | (100 rxns) |
| OTI Maolán | 80 ml |
| Maolán GW | 2 × 20 ml |
| Maolán Elution | 20 ml |
| Mioncholúin DNA FastPure-G | 100 |
OTI Maolán:Maolán ceangailteach DNA.
Maolán GW:Maolán níocháin;cuir eatánól absalóideach leis an toirt atá léirithe ar an mbuidéal sula n-úsáidfear é.
Maolán Elution:Elution.
Mioncholúin DNA FastPure-G:Colúin asaithe DNA.
Feadáin Bailiúcháin 2 ml:Feadáin bhailiúcháin le haghaidh scagacháin.
Ábhair Ullmhaithe
Feadáin steiriliú 1.5 ml, eatánól absalóideach agus iseapropanól (nuair a bhíonn blúire DNA ≤100 bp, cuir 1 toirt leis
isopropanol go glóthach toirt 1), folctha uisce.
Próiseas Turgnaimh
Cuir 80 ml eatánóil leis chun Maolán GW a chaolú mar a léirítear ar an gclib sula n-úsáidtear é, stóráil ag teocht an tseomra.
Meicníocht
1. Réiteach imoibrithe PCR
Scéim eastósctha glóthach: Cuir scéim aisghabhála réitigh imoibrithe Maolán GDP PCR leis ar chomhmhéid:Cuir 5 huaire an Mhaoláin toirte leis
2. OTI Ríomh toirt an ghlóthaigh(100 μl cothrom le 100 mg )
Glóthach a dhíscaoileadh
3. Preheat ag 50 ~ 55℃
4. Nigh Ceangail
Cuir 300 μL de OTI Maolán leis*
Cuir 700 μL de Maolán GW leis
Cuir 700 μL de Maolán GW leis
5. Elute
Cuir 20 – 30μL de Mhaoláin Elution nó uisce dí-ianaithe leis
Nótaí * Aisghabháil sreabhach imoibrithe PCR gan an chéim seo
Clár eastóscadh glóthach
1. Tar éis leictreafóiréis DNA chun blúirí DNA a chodánú, máil an stripe singil de bhlúire DNA ón glóthach agarose faoi sholas UV.Moltar páipéar ionsúiteach a úsáid chun taise dealraitheach glóthach a ionsú agus méid an tslis fhoirmiú a íoslaghdú trí agarose breise a bhaint agus is féidir leat.Meáigh an slice glóthach (gan feadán micrealártheifneoir) chun a thoirt a ríomh: Tá toirt na glóthacha 100 mg thart ar 100 μL, ag glacadh leis go bhfuil an dlús 1g/ml.
2. Cuir OTI Maolán toirte comhionann leis, gor ag 50 ~ 55 ℃ ar feadh 7-10 nóiméad (de réir mhéid an fhoirmiú, coigeartaigh an t-am goir go dtí go mbeidh an glóthach tuaslagtha go hiomlán).Inbhéartaigh an feadán 2 uair le linn an goir.
Δ Ní bheidh tionchar ag cur isteach 1-3 imleabhar de OTI Maoláin ar éifeachtúlacht aisghabhála DNA.Má tá an blúire DNA le haisghabháil <100 bp, is gá 3 imleabhar de OTI Maolán a chur leis;nuair a bhíonn an slice glóthach tuaslagtha go hiomlán, cuir 1 toirte isopropanol agus measc go maith, ansin leanúint ar aghaidh go dtí an chéad chéim eile.
3. Lártheifneoir go hachomair chun an sampla a thabhairt go bun an fheadáin, cuir isteach an FastPure DNA Mini Columns-G isteach sna Feadáin Bailiúcháin 2 ml, aistrigh go cúramach an tuaslagán de 700 μL ar a mhéad uair sa lá.
am chun na colúin scagacháin, lártheifneoir ag 12,000 rpm (13,800 X g) ar feadh 30-60 soic.
4. Scrios an scagáit agus cuir 300 μL de OTI Maolán leis an gcolún, gor ag teocht an tseomra ar feadh 1 nóiméad, lártheifneoir ag 12,000 rpm (13,800 X g) ar feadh 30-60 soicind.
5. Caith amach an scagáit agus cuir 700 μL de Maolán GW (féach an bhfuil absalóideach eatánól curtha leis roimh ré!) Leis an gcolún, lártheifneoir ag 12,000 rpm (13,800 X g) ar feadh 30-60 soicind.
Δ Cuir Maolán GW timpeall bhalla an cholúin asaithe le do thoil, nó cuir clúdach cúil Buffer GW leis agus measc é bun os cionn ar feadh 2 - 3 huaire chun cabhrú leis an salann atá ag cloí le balla an fheadáin a shruthlú go hiomlán.
6. Déan céim 5 arís.
Δ Is féidir le sruthlú le Buffer GW faoi dhó a chinntiú go mbaintear an salann go hiomlán agus deireadh a chur leis an tionchar ar thurgnaimh ina dhiaidh sin.
7. Caith amach an scagáit agus lártheifneoir an cholún folamh ag 12,000 rpm (13,800 X g) ar feadh 2 nóiméad.
8. Cuir an colún isteach i bhfeadán microcentrifuge glan 1.5 ml, cuir 20 - 30 μL de Maolán Elution go lár an membrane colún, gor ar feadh 2 nóiméad, agus ansin lártheifneoir ag 12,000 rpm (13,800 X g) ar feadh 1 nóiméad.Caith amach an colún, stóráil an DNA faighte ag -20 .
Δ D’fhéadfadh sé go mbeadh sé ina chuidiú an forshnáthán de chéim 8 a aistriú go dtí an colún chun é a mhúscailt arís agus an Maolán Elution a réamhthéamh go 55 (nuair a bheadh blúire DNA >3 kb) chun an éifeachtúlacht aisghabhála a mhéadú.
Clár athshlánaithe táirgí PCR saor in aisce,
Tá an prótacal seo infheidhme maidir le blúirí DNA ó tháirgí PCR, córas imoibrithe einsímí agus táirgí amh DNA eile (lena n-áirítear DNA géiniteach) a íonú.Is féidir leis an réiteach seo a bhaint go héifeachtach nucleotides éagsúla, primers, dimers primer, móilíní salainn, einsímí agus neamhíonachtaí eile.
1. Go hachomair lártheifneoir táirgí PCR, réiteach imoibriú einsímeach, agus táirgí amh DNA eile.Déan meastachán ar a dtoirt le pípéad agus aistrigh chuig feadán aimridithe 1.5 ml nó 2 ml.Cuir ddH2O leis go dtí an toirt suas go dtí 100 μL;agus maidir le DNA géanómach le tiúchan ard, cabhróidh caolú go 300 μL le ddH2O le héifeachtúlacht aisghabhála a fheabhsú.
2. Cuir 5 imleabhar de OTI Maolán leis, measc go maith trí inbhéartú nó vortexing.Má tá blúire spéise DNA >100 bp, is gá 1.5 toirt breise (samplaí + Maolán OTI) eatánóil a chur leis.
3. Cuir an colún ar ais isteach sa fheadán bailiúcháin, aistrigh an meascán fíor go dtí an colún, lártheifneoir ag 12,000 rpm (13,800 × g) ar feadh 30 - 60 soicind.Más é toirt an tuaslagáin mheasctha ná >700 µL, cuir an colún asaithe ar ais isteach sa fheadán bailiúcháin, aistrigh an tuaslagán atá fágtha go dtí an colún asaithe, agus cuir lártheifneoir ag 12,000 rpm (13,800 × g) ar feadh 30 - 60 soicind.
4. Tagraíonn an chéad fheidhmíocht eile do chéim 5 – 8 de 08- 1/Clár eastóscadh glóthach.
Feidhmchláir
Tiúcháin éagsúla de fhoirmiú agarose TAE nó TBE;Táirgí PCR, córais imoibrithe einsímeacha nó táirgí amh DNA eile a fhaightear trí mhodhanna éagsúla.Bhí blúirí aisghafa sa raon ó70 bp -20 kb.
Nótaí
Le húsáid taighde amháin.Níl sé le húsáid i nósanna imeachta diagnóiseacha.
1. Cuir 80 ml eatánóil leis chun Maolán GW a chaolú mar a léirítear ar an gclib sula n-úsáidfear é, stóráil ag teocht an tseomra.
2. Má tá an OTI Maolán éasca le deascadh le linn stórála íseal-teocht, is féidir é a chur ag teocht an tseomra ar feadh tréimhse ama roimh úsáid.Más gá, is féidir é a réamhthéite i ndabhach uisce 37 ℃ go dtí go bhfuil an deascán tuaslagtha go hiomlán, agus ansin is féidir é a úsáid tar éis a mheascadh.
3. Socraigh teocht an folctha uisce go 50 ~ 55 ℃ roimh ré.
4. I gcéim 1 den chlár eastóscadh glóthach 08-1/glóthach, laghdófar go mór an t-am tuaslagtha agus méadóidh sé éifeachtúlacht aisghabhála má laghdaítear an méid slisne glóthach (Is furasta DNA líneach a hidrealú nuair a nochtar go leanúnach ag teocht ard).Ná nocht glóthach DNA do UV ar feadh i bhfad, mar is féidir le solas ultraivialait damáiste DNA a dhéanamh.
5. Déan an glóthach a dhíscaoileadh i gcéim 2 den chlár eastósctha 08- 1/Gel go hiomlán, nó cuirfear isteach go mór ar éifeachtúlacht aisghabhála DNA.
6. Preheat Elution Maolán nó ddH2O go 55 ℃, rud a chabhraíonn chun feabhas a chur ar éifeachtúlacht elution DNA.Moltar DNA a stóráil i eluent de 2.5 mM Tris-HCl, pH 7.0 - 8.5.
