2 × Sensi Direct Premix-UNG (Probe qPCR)
Uimhir Chait: HCB5151A
Tá SensiDirect Premix-UNG (Probe qPCR) deartha chun PCR a dhéanamh go díreach ó shamplaí gan eastóscadh DNA nó ullmhú samplach.Tá an t-imoibrí seo comhdhéanta de pholaiméiráis DNA te-thosaithe, glycosylase DNA uracil (UNG), Inhibitor RNase, MgCl2, dNTPs (le dUTP in ionad dTTP), agus cobhsaitheoirí, le haghaidh PCR cainníochtúil (qPCR).Réamhfhoirmíonn an t-imoibrí seo ard-chaoinfhulaingt cosc, agus mar sin is féidir é a chur i bhfeidhm go díreach ar shamplaí cosúil le swab scornach, seile, fuil iomlán frith-théachtach, plasma, agus serum a bhrath gan aon eastóscadh DNA.Úsáideann an t-imoibrí maolán dílseánaigh le haghaidh qPCR le heinsímí measctha de DNA polymerase frith-chosc agus einsím UNG.Mar sin, is féidir leis aimpliú maith ar spriocghéin a fháil i samplaí ina bhfuil coscairí agus bac a chur ar aimpliú dearfach bréagach de bharr truaillithe iarmharach PCR agus aerasóil.Tá an t-imoibrí seo comhoiriúnach leis an chuid is mó d'ionstraimí cainníochtúla PCR fluaraiseacha, mar shampla Bithchórais Fheidhmeach, Eppendorf, Bio-Rad, Roche agus mar sin de.
Comhpháirteanna
1. 50×SensiDirectEinsím/UNG Meascán
2. Maolán Premix SensiDirect 2 × (dUTP)
Coinníollacha stórála
Ba cheart na comhpháirteanna go léir a choinneáil ag -20 ℃ le haghaidh stórála fadtéarmach agus 4 ℃ ar feadh suas le 3 mhí.Measc go maith tar éis leá agus lártheifneoir roimh úsáid.Seachain reo-leá go minic.
Prótacal Rothaíochta
Céim | Teocht | Am | Rothaíocht |
Díleá | 50 ℃ | 2 nóiméad | 1 |
Gníomhachtaithe polaiméire | 95 ℃ | 1-5 nóiméad | 1 |
Denature | 95 ℃ | 10-20s | 40-50 |
Annealing/Síneadh | 56-64 ℃ | 20-60s |
Treoracha le haghaidh píblíne
Imoibrí | Toirt in aghaidh imoibriú | Toirt in aghaidh an imoibrithe | Tiúchan Deiridh |
Maolán Premix SensiDirect 2×(dUTP) | 12.5µL | 25µL | 1× |
50 × SensiDirect Einsím/UNG Meascán | 0.5µL | 1µL | 1× |
25×Primer-Probe Meascán1, 2 | 1µL | 2µL | 1× |
Sampla3, 4 | - | - | - |
ddH2O | - | - | - |
Toirt iomlán | 25 μL | 50 μL | - |
1. De ghnáth is é 0.2μM an tiúchan deiridh de primer.Le haghaidh torthaí níos fearr, is féidir an tiúchan primer a uasmhéadú laistigh den raon 0.2-1μM.
2. Go ginearálta, is féidir an tiúchan probe a uasmhéadú laistigh den raon 0.1-0.3μM.Baineann an tiúchan is fearr den theprobe leis an ionstraim aimplithe PCR fíor-ama, an cineál taiscéalaí, agus an cineál substainte lipéadaithe fluaraiseacha.Déan tagairt le do thoil don lámhleabhar ionstraim nó do riachtanais shonracha gach taiscéalaí fluaraiseachta.
3. Tá cineálacha éagsúla samplaí ann go bhfuil cineálacha éagsúla agus ábhar inhibitor agus uimhir chóip de spriocghéine.Ba cheart méid an tsampla a mheas de réir riocht iarbhír.Déan caolú ar an sampla trí uisce saor ó núicléas nó Maolán TE a chur leis, más gá.
4. Méid molta samplaí éagsúla:
Sampla | Íosluchtaigh toirt ar cheann 50 μL imoibriú | Uasmhéid cóimheas |
Fuil iomlán anticoagulated | 2.5 μL | 5% |
Plasma | 15 μL | 30% |
Séiream | 10 μL | 20% |
Swab scornach | 10 μL | 20% |
seile | 10 μL | 20% |
Rialú Cáilíochta
1. Brath feidhm: íogaireacht, sainiúlacht agus atrialltacht qPCR.
2. Gan aon ghníomhaíocht nuclease exogenous: gan aon truailliú endonuclease exogenous agus exonuclease.
Nótaí Táirge
1. Fostaíonn an táirge seo cineál nua de pholaiméiráis DNA te-túsaithe, is féidir a ghníomhachtú i 1-5 nóiméad. Ós rud é go bhfuil a maolán imoibrithe optamaithe, tá sé níos oiriúnaí do fhluaraiseacht dúbailte nó iolrach PCR cainníochtúil ag baint úsáide as modh probe.
2. Má tá luach Rn an aimplithe PCR ró-íseal nó má tá an t-aimpliú bac ar ndóigh, d'fhéadfadh sé go bhfeabhsófaí na torthaí má laghdaítear méid an tsampla, méadú ar an méid imoibrithe nó caolú an tsampla roimhe seo.
3. Ba cheart go leanfadh bailiú fola, seile, fual, swab scornach, etc. na ceanglais chritéir chliniciúla, agus is féidir sampla úr a úsáid chun díghrádú aigéad núicléach a chosc.
4. Ós rud é go bhfuil éifeachtúlacht úsáide difriúil ag aimplicain éagsúla le dUTP agus íogaireacht do UNG, ba cheart na himoibrithe a bharrfheabhsú má laghdaítear an íogaireacht braite agus córas UNG á úsáid.Déan teagmháil linn le do thoil le haghaidh tacaíocht theicniúil más gá.
5. Chun aimpliú táirgí PCR tugtha anonn idir frithghníomhartha aonchéime a sheachaint, tá gá le limistéar turgnamhach tiomnaithe agus pípéad le haghaidh aimplithe.Oibriú le lámhainní agus athraigh go minic agus ná oscail an feadán imoibrithe tar éis aimpliú PCR.