Trealamh Géinitíopála Luiche

Cat Uimh: HCR2021A

Is trealamh é an táirge seo atá deartha chun géinitíopaí luiche a shainaithint go tapa, lena n-áirítear eastóscadh amh DNA agus córas aimplithe PCR.Is féidir an táirge a úsáid le haghaidh aimpliú PCR go díreach ó eireaball luiche, cluas, ladhar agus fíocháin eile tar éis scoilteachta simplí ag Lysis Maolán agus Proteinase k.Gan díleá thar oíche, eastóscadh feanól-clóraform nó íonú colún, atá simplí agus a ghiorrú an t-am-íditheach turgnaimh.Tá an táirge oiriúnach le haghaidh aimpliú blúirí sprice suas le 2kb agus imoibrithe PCR ilphléacs le suas le 3 phéire primers.Tá polymerase DNA a ndearnadh innealtóireacht ghéiniteach air, Mg. sa Mheascán PCR Díreach Fíocháin Luiche 2 ײ⁺, dNTPs agus córas maolánach optamaithe chun éifeachtacht aimplithe ard agus caoinfhulaingt coscaire a sholáthar, ionas gur féidir imoibrithe PCR a dhéanamh trí theimpléad agus primers a chur leis agus an táirge a athhiodráitiú go 1 ×.Tá bonn feiceálach “A” ag an deireadh 3′ ag an táirge PCR atá méadaithe leis an táirge seo agus is féidir é a úsáid go díreach le haghaidh clónáil TA tar éis íonú.

Comhpháirteanna

Coinníollacha Stórála

Ba chóir táirgí a stóráil ag -25 ~ -15 ℃ ar feadh 2 bhliain.Tar éis leá, is féidir Lysis Maolán a stóráil ag 2 ~ 8 ℃ d'ilúsáid ghearrthéarmach, agus é a mheascadh go maith nuair a úsáidtear é.

Iarratas

Tá an táirge seo oiriúnach le haghaidh anailíse cnag na luiche, braite trasgenach, géinitíopáil agus mar sin de.

Gnéithe

1.Oibriú simplí: ní gá DNA genómach a bhaint as;

2.Iarratas leathan: oiriúnach le haghaidh aimpliú díreach fíocháin luiche éagsúla.

Treoracha

1.Scaoileadh DNA genomic

1) Ullmhú lysate

Ullmhaítear lysate fíocháin de réir líon na samplaí luiche a bheidh le lysate (ba chóir lysate fíocháin a ullmhú ar an láthair de réir an dáileog agus é a mheascadh go críochnúil lena úsáid), agus is é seo a leanas cion na n-imoibrithe a theastaíonn le haghaidh sampla amháin:

2) Ullmhúchán Samplach agus Lysis

Úsáid Fíocháin Molta

Glac méid cuí samplaí fíocháin luiche i bhfeadáin lártheifneora glan, cuir 200μL de lysate fíocháin úr le gach feadán lártheifneoir, vortex agus croith, ansin gor ag 55 ℃ ar feadh 30 nóiméad, agus ansin teas ag 98 ℃ ar feadh 3 nóiméad.

3) Lártheifneoiriú

Croith an lysate go maith agus lártheifneoir ag 12,000 rpm ar feadh 5 nóiméad.Is féidir an comhshamhail a úsáid mar theimpléad le haghaidh aimpliú PCR.Má tá an teimpléad ag teastáil le haghaidh stórála, aistrigh an comhshó go feadán lártheifneoir steiriúil eile agus stóráil ag -20 ℃ ar feadh 2 sheachtain.

2.Aimpliú PCR

Bain an Meascán PCR Díreach Fíocháin 2 × Luiche ó -20 ℃ agus leá ar an oighear, measc bun os cionn agus ullmhaigh an córas imoibrithe PCR de réir an tábla seo a leanas (oibriú ar oighear):

Nóta:

a) Níor cheart go mbeadh an méid a cuireadh leis níos mó ná 1/10 den chóras, agus má chuirtear an iomarca leis, féadfar bac a chur ar aimpliú PCR.

Coinníollacha PCR Molta

Nóta:

a) Teocht annealing: Ag tagairt do luach Tm an primer, moltar an teocht annealing a shocrú go dtí luach Tm níos lú an primer +3~5 ℃.

Fadhbanna Coitianta agus Réitigh

1.Uimh stiallacha spriocdhírithe

1) Táirge lysis iomarcach.Roghnaigh an méid teimpléad is oiriúnaí, de ghnáth nach mó ná 1/10 den chóras;

2) Méid sampla ró-mhór.Caolaigh an lysate 10 n-uaire agus ansin a mhéadú, nó a laghdú méid an tsampla agus ath-lysis;

3) Níl samplaí fíocháin úr.Moltar samplaí fíocháin úra a úsáid;

4) droch-chaighdeán primer.Bain úsáid as DNA genomic le haghaidh aimplithe chun cáilíocht an primer a fhíorú agus dearadh an primer a bharrfheabhsú.

2.Aimpliú neamhshonrach

1) Tá an teocht annealing ró-íseal agus tá an líon timthriall ró-ard.an teocht annealing a mhéadú agus líon na dtimthriallta a laghdú;

2) Tá tiúchan an teimpléid ró-ard.Laghdaigh méid an teimpléid nó caolaigh an teimpléad 10 n-uaire tar éis aimplithe;

3) Sainiúlacht primer bocht.Optamaigh an dearadh primer.

Nótaí

1.D'fhonn tras-éilliú a sheachaint idir samplaí, ba cheart uirlisí samplála iolracha a ullmhú, agus is féidir dromchla na n-uirlisí a ghlanadh le tuaslagán fochlóiríte sóidiam 2% nó níos glaine aigéad núicléach tar éis gach samplála má tá gá le húsáid arís agus arís eile.

2.Moltar fíocháin luch úra a úsáid, agus níor cheart go mbeadh an méid samplála ró-mhór chun nach gcuirfí isteach ar thorthaí aimpliúcháin.

3 .Ba cheart go seachnódh Lysis Maolán reo-leá go minic, agus is féidir é a stóráil ag 2 ~ 8 ℃ le haghaidh úsáide il-téarmacha gearrthéarmacha.Má stóráiltear é ag teocht íseal, féadfaidh deascadh tarlú, agus ní mór é a thuaslagadh go hiomlán roimh úsáid.

4.Ba cheart go seachnódh PCR Mix reo-leá go minic, agus is féidir é a stóráil ag 4 ℃ le haghaidh úsáid ghearrthéarmach arís agus arís eile.

5.Níl an táirge seo ach le haghaidh taighde turgnamhach eolaíoch agus níor cheart é a úsáid i ndiagnóis nó i gcóireáil chliniciúil.