M-MLV Droim ar Ais Trascríobh
Faigheann RevScript Reverse transcriptase trí theicneolaíocht innealtóireachta géiniteach.Tá cumas sintéise cDNA níos airde aige, cobhsaíocht theirmeach agus teorainn teochta imoibrithe (suas le 60 ° C).Tá an táirge cDNA sintéiseithe suas le 10 kb.Feabhsaíonn sé cleamhnas na dteimpléad agus tá sé oiriúnach le haghaidh trascríobh droim ar ais ar theimpléid RNA le struchtúr tánaisteach casta nó géinte ísealchóipe.
Comhpháirteanna
| Comhpháirt | HC2003B (10,000U) | HC2003B (5*10,000U) | HC2003B (200,000U) |
| Athscríbhinn Droim ar Ais RevScript (200U/μL) | 50 μL | 5×50 μL | 1 ml |
| 5 × Maolán RevScript | 250 μL | 1.25 ml | 5 ml |
Coinníoll Stórála
Ba chóir an táirge seo a stóráil ag -25 ° C ~ -15 ° C ar feadh 2 bhliain.
Sainmhíniú ar an Aonad
Ionchorpraíonn aonad amháin 1 nmol de dTTP isteach in ábhar dothuaslagtha aigéid i 10 nóiméad ag 37°C ag baint úsáide as Oligo(dT) mar primers.
Socrú Imoibrithe
1.Dínádúrú teimpléad RNA (Tá an chéim seo roghnach, cuidíonn dínádúrú teimpléad RNA chun na struchtúir tánaisteacha a oscailt, rud a fheabhsóidh toradh an chéad snáithe cDNA.)
| Comhpháirteanna | Toirt (μL) |
| RNase ddH saor in aisce2O | Chuig 13 |
| Oligo(dT)18 (50 μmol/L) nó Random Primer (50 μmol/L) Nó Primers Sonracha Géine (2 μmol/L) | 1 |
| nó 1 | |
| nó 1 | |
| Teimpléad RNA | X a |
Nótaí:
1) a: RNA Iomlán: 1-5 ug nó mRNA: 1-500 ng
2) Goir ag 65°C ar feadh 5 nóiméad, ansin ag aistriú ar an oighear láithreach chun fuarú ar feadh 2 nóiméad.Lártheifneoiriú gairid chun leacht imoibriúcháin a bhailiú, cuir an tuaslagán imoibriúcháin trascríobh droim ar ais mar a thaispeántar sa tábla seo a leanas.Go réidh pípéad a mheascadh.
1.Ullmhú an mheascáin imoibriúcháin (20 μL toirt)
| Comhpháirteanna | Toirt (μL) |
| Meascán den chéim roimhe seo | 13 |
| 5×Maolán | 4 |
| Meascán dNTP (10nmol/L) | 1 |
| Trascríobh droim ar ais (200 U/μL) | 1 |
| Coisctheoir RNase (40 U/μL) | 1 |
1.Déan an t-imoibriú faoi na coinníollacha seo a leanas:
| Teocht (°C) | Am |
| 25 °Ca | 5 nóiméad |
| 42 °Cb | 15-30 nóiméad |
| 85 °Cc | 5 nóiméad |
Nótaí:
1) a.Ní gá goir ag 25°C ar feadh 5 nóiméad ach amháin chun na heiciméirí randamacha a úsáid.Ná fág an chéim seo agus tú ag úsáid Oligo (dT)18nó Géin-Phríomhaire Sonrach.
2) b.Is í an teocht trascríobh droim ar ais molta ná 42 ° C, I gcás teimpléid le struchtúir tánaisteacha casta nó ábhar ard GC, moltar an teocht imoibrithe a ardú go 50-55 ° C.
3) c.Téamh ag 85°C ar feadh 5 nóiméad chun an trascríobh-aisiompú a dhíghníomhachtú.
4) Is féidir an táirge a úsáid go díreach i imoibrithe PCR nó qPCR, nó a stóráil ag -20 ° C le haghaidh stórála gearrthéarmach.Moltar na táirgí a ailíniú agus a stóráil ag -80 ° C le haghaidh stórála fadtéarmach.Seachain reo-leá go minic.
5) Tá an táirge oiriúnach le haghaidh RT-qPCR aon-chéim, moltar 10-20 U droim ar ais transcriptase a chur leis do gach córas imoibrithe 25μL, nó an méid transcriptase droim ar ais a mhéadú de réir a chéile de réir an staid iarbhír.
Nótaí
1.Coinnigh an limistéar turgnamhach glan;Ba chóir lámhainní glan agus maisc a chaitheamh le linn oibriú.Ba cheart go mbeadh na hábhair inchaite go léir a úsáidtear sa turgnamh saor ó RNase chun éilliú RNase a chosc.
2.Ba cheart gach nós imeachta a dhéanamh ar oighear chun díghrádú RNA a chosc.
3.Moltar samplaí RNA d'ardchaighdeán chun ard-éifeachtúlacht trascríobh droim ar ais a chinntiú.
4.Tá an táirge seo le haghaidh úsáide taighde amháin.
5.Oibrigh le cótaí saotharlainne agus lámhainní indiúscartha, ar mhaithe le do shábháilteacht.
