Polymerase DNA Taq láidir
Is polymerase DNA tosaigh te é Robustart Taq DNA Polymerase.Ní hamháin gur féidir leis an táirge seo bac níos fearr a chur ar an imoibriú neamhshonrach de bharr anáil neamhshonrach na primers nó comhiomlánú primer sa phróiseas ullmhúcháin agus aimplithe córais PCR.Dá bhrí sin, tá sainiúlacht den scoth aige agus tá sé níos éifeachtaí chun teimpléid tiúchan íseal a aimpliú, agus tá sé oiriúnach le haghaidh imoibriú aimplithe PCR ilphléacsach.Thairis sin, tá infheidhmeacht an-mhaith ag an táirge seo, agus is féidir torthaí aimplithe cobhsaí a fháil i gcineálacha éagsúla imoibrithe PCR.
Comhpháirteanna
1.5 U/μL Polaiméaráis DNA Taq láidir
2.10 × PCR Maolán II (Mg²+ saor in aisce) (roghnach)
3.25 mM MgCl2(roghnach)
* Níl dNTP agus Mg²+ ag 10 × PCR Maolán II (Mg²+ saor in aisce), cuir dNTP agus MgCl leis2nuair a bhíonn an córas imoibrithe á ullmhú.
Iarratais Molta
1.aimpliú tapa.
2.Il-aimpliú.
3.Aimpliú díreach fola, táithíní, agus samplaí eile.
4.Galair riospráide a bhrath.
Coinníoll Stórála
-20 ° C le haghaidh stórála fadtéarmach, ba chóir é a mheascadh go maith sula n-úsáidfear é, seachain reo-leá go minic.
*Má tharlaíonn deascadh tar éis cuisniúcháin, is gnáth é;moltar é a chothromú le teocht an tseomra sula ndéantar é a mheascadh agus a úsáid.
Sainmhíniú ar an Aonad
Sainmhínítear aonad gníomhach amháin (U) mar an méid einsím a ionchorpraíonn 10 nmol de dhíocsairbúnúicléitíd in ábhar dothuaslagtha aigéid ag 74°C ar feadh 30 nóiméad ag baint úsáide as DNA speirme bradán gníomhachtaithe mar theimpléad/primer.
Rialú Cáilíochta
1.Tá íonacht electrophoretic SDS-PAGE níos mó ná 98%.
2.Íogaireacht aimpliúcháin, rialú bhaisc go bhaisc, cobhsaíocht.
3.Gan aon ghníomhaíocht nuclease exogenous, gan aon éilliú endonuclease exogenous nó exonuclease
Treoracha
Socrú Imoibrithe
Comhpháirteanna | Toirt (μL) | Tiúchan Deiridh |
10 × PCR Maolán II (Mg²+ saor in aisce)a | 5 | 1× |
dNTPs (10mM an ceann dNTP) | 1 | 200 μM |
25 mM MgCl2 | 2-8 | 1-4 mM |
Polymerase DNA láidir Taq (5U/μL) | 0.25-0.5 | 1.25-2.5 U |
25 × meascán primerb | 2 | 1× |
Teimpléad | - | < 1 μg/imoibriú |
ddH2O | Go dtí 50 | - |
Nótaí:
1) a.Níl dNTP agus Mg²+ sa mhaolán, cuir dNTP agus MgCl leis le do thoil2nuair a bhíonn an córas imoibrithe á ullmhú.
2) b.Má úsáidtear iad le haghaidh qPCR/qRT-PCR, ba cheart taiscéalaithe fluaraiseacha a chur leis an gcóras imoibrithe.De ghnáth, tabharfaidh tiúchan primer deiridh de 0.2 μM torthaí maithe;má tá an fheidhmíocht imoibrithe bocht, is féidir an tiúchan primer a choigeartú sa raon 0.2-1 μM.De ghnáth déantar an tiúchan probe a uasmhéadú sa raon 0.1-0.3 μM.Is féidir turgnaimh ar ghrádán comhchruinnithe a dhéanamh chun teacht ar an meascán is fearr de phriméir agus de thaiscéalaí.
Prótacal rothaíochta teirmeach
PCR rialtapróiseas | |||
Céim | Teocht | Am | Timthriallta |
Réamh-dhínádúrú | 95 ℃ | 1-5 nóiméad | 1 |
Dínádúrú | 95 ℃ | 10-20 soic | 40-50 |
Annealing / Síneadh | 56-64 ℃ | 20-60 soic |
PCR tapapróiseas | |||
Céim | Teocht | Am | Timthriallta |
Réamh-dhínádúrú | 95 ℃ | 30 soic | 1 |
Dínádúrú | 95 ℃ | 1-5 soic | 40-45 |
Annealing / Síneadh | 56-64 ℃ | 5-20 soic |
Nótaí
1.Níor cheart go mbeadh an ráta aimplithe de pholaiméiráis DNA gasta níos lú ná 1 kb/10 s.Tá éagsúlacht mhór ag baint leis an ardú teochta agus an ráta titime, an modh rialaithe teochta agus éifeachtacht seoltaí teasa ionstraimí PCR éagsúla, mar sin moltar na coinníollacha imoibrithe is fearr is féidir a bhaint as an ionstraim PCR tapa ar leith.
2.Tá an córas an-inoiriúnaithe, le sainiúlacht agus íogaireacht níos airde.
3.Oiriúnach le húsáid mar imoibrithe braite PCR ard-íogaireachta, agus is féidir iad a úsáid in imoibrithe aimpliúcháin PCR ilphléacs.
4.5′→3′ gníomhaíocht polaiméaráis, gníomhaíocht exonuclease 5′→3′;gan aon ghníomhaíocht exonuclease 3′→5′;gan feidhm léamh profaí.
5.Oiriúnach do thástáil cháilíochtúil agus chainníochtúil PCR agus RT-PCR.
6.Is é A foirceann 3′ an táirge PCR, ar féidir é a chlónáil go díreach i veicteoir T.
7.Moltar an modh trí chéim le haghaidh primers le teocht íseal annealing nó le haghaidh aimpliú blúirí níos faide ná 200 bp.