PNGase F
Is é Peiptíd-N-Glycosidase F (PNGase F) an modh einsímeach is éifeachtaí chun beagnach gach olagaishiúicrídí N-nasctha a bhaint de ghliocóphróitéin.Is amidase é PNGase F, a scoilteann idir an chuid is mó de GlcNAc agus iarmhair asparagine d'oligosaccharides ard mannose, hibrideach agus casta ó ghliocóphróitéiní N-nasctha.
Iarratas
Tá an einsím seo úsáideach chun iarmhair carbaihiodráití a bhaint as próitéiní.
Ullmhúchán agus sonraíocht
| Dealramh | Leacht Gan Dath |
| Próitéin íonachta | ≥95% (ó SDS-PAGE) |
| Gníomhaíocht | ≥500,000 U/mL |
| Eaxoglycosidase | Níorbh fhéidir aon ghníomhaíocht a bhrath (ND) |
| Endoglycosidase F1 | ND |
| Endoglycosidase F2 | ND |
| Endoglycosidase F3 | ND |
| Endoglycosidase H | ND |
| Protease | ND |
Airíonna
| Uimhir CE | 3.5.1.52(Athchuingreach ó mhiocrorgánach) |
| Meáchan móilíneach | 35 kDa (SDS- LEATHANACH) |
| Pointe isealeictreach | 8. 14 |
| pH is fearr | 7.0-8.0 |
| Teocht is fearr | 65 °C |
| Sainiúlacht an tsubstráit | Naisc glycosideacha scoilte idir GlcNAc agus iarmhair asparagine Fíor.1 |
| Láithreáin aitheantais | Gliocáin N-nasctha ach amháin má tá α1-3 fúcóis iontu Fíor 2 |
| Gníomhaitheoirí | DTT |
| Cosc | SDS |
| Teocht stórála | -25 ~ -15 ℃ |
| Díghníomhú Teasa | Díghníomhaítear meascán imoibrithe 20µL ina bhfuil 1µL de PNGase F trí gor ag 75 °C ar feadh 10 nóiméad. |
Fíor 1 Sainiúlacht fhoshraith PNGase F
Fíor 2 Suíonn aithint PNGase F.
Nuair a bhíonn na hiarmhair GlcNAc inmheánacha nasctha le α1-3 fucós, ní féidir le PNGase F olagaishiúicrídí N-nasctha a ghlanadh ó ghliocóphróitéiní.Tá an modhnú seo coitianta i bplandaí agus i roinnt glycoproteiní feithidí.
Cospaints
|
| Comhpháirteanna | Tiúchan |
| 1 | PNGase F | 50 µl |
| 2 | Maolán Dínádúraithe Glycoprotein 10 × | 1000 µl |
| 3 | 10×GlycoBuffer 2 | 1000 µl |
| 4 | 10% NP-40 | 1000 µl |
Sainmhíniú aonaid
Sainmhínítear aonad(U) amháin mar an méid einsím a theastaíonn chun >95% den charbaihiodráit a bhaint as 10 µg de RNase B dínádúraithe in 1 uair ag 37°C i dtoirt imoibrithe iomlán 10 µL.
Coinníollacha imoibrithe
1. Tuaslaig 1-20 µg de ghliocóphróitéin le huisce dí-ianaithe, cuir Maolán Dínádúraithe Glycoprotein 10 × 10 × agus H2O (más gá) chun toirt imoibrithe iomlán 10 µl a dhéanamh.
2.Goir ag 100°C ar feadh 10 nóiméad, fuaraigh ar oighear é.
3.Cuir 2 µl 10 × GlycoBuffer 2, 2 µl 10% NP-40 leis agus measc.
4.Cuir 1-2 µl PNGase F agus H leis2O (más gá) chun toirt imoibrithe iomlán 20 µl agus meascán a dhéanamh.
5.Goir imoibriú ag 37°C ar feadh 60 nóiméad.
6.Le haghaidh anailíse SDS-PAGE nó anailís HPLC.
