M-MLV Neoscript Droim ar ais Trascríobh

Is transcriptase droim ar ais é Neoscript Reverse Transcriptase a fhaightear trí scagadh sócháin a dhéanamh ar ghéin M-MLV de bhunús víreas leoicéime Moloney murine agus léiriú in E.coli.Cuireann an einsím deireadh le gníomhaíocht RNase H, tá caoinfhulaingt teochta níos airde aige, agus tá sé oiriúnach le haghaidh trascríobh droim ar ais ardteochta.Dá bhrí sin, tá sé cabhrach deireadh a chur le héifeachtaí neamhfhabhracha struchtúr ardleibhéil RNA agus fachtóirí neamh-shonracha ar shintéis cDNA, agus tá cobhsaíocht níos airde agus cumas sintéise trascríobh droim ar ais.Tá cobhsaíocht níos airde ag an einsím agus cumas sintéise trascríobh droim ar ais.

Comhpháirteanna

1.200 U/μL Trascríobh Droim ar Ais Neoscript

2.5 × Maolán Céad Snáithe (roghnach)

* Níl dNTP ag Maolán Céad-shnáithe 5 ×, cuir dNTPanna leis agus an córas imoibrithe á ullmhú

Iarratas Molta

1.qRT-PCR aon-chéim.

2.Brath víreas RNA.

Coinníoll Stórála

-20 ° C le haghaidh stórála fadtéarmach, ba chóir é a mheascadh go maith sula n-úsáidfear é, seachain reo-leá go minic.

Sainmhíniú ar an Aonad

Ionchorpraíonn aonad amháin 1 nmol de dTTP i 10 nóiméad ag 37°C ag úsáid poly(A)•oligo(dT)₂₅mar theimpléad/primer.

Rialú Cáilíochta

1.Tá íonacht electrophoretic SDS-PAGE níos mó ná 98%.

2.Íogaireacht aimpliúcháin, rialú bhaisc go bhaisc, cobhsaíocht.

3.Gan aon ghníomhaíocht nuclease exogenous, gan aon éilliú endonuclease exogenous nó exonuclease

Socrú Imoibrithe le haghaidh Réiteach Imoibrithe an Chéad Slabhra

1.Ullmhú an mheascáin imoibriúcháin

Nótaí:a/b: Roghnaigh cineálacha éagsúla primers de réir do riachtanas turgnamhach.

2.Teas ag 65°C ar feadh 5 nóiméad agus fuaraigh go tapa ar oighear ar feadh 2 nóiméad.

3.Cuir na comhpháirteanna seo a leanas leis an gcóras thuas go dtí toirt iomlán 20µL agus measc go réidh:

4.Please déan an t-imoibriú de réir na gcoinníollacha seo a leanas:

(1) Má úsáidtear Random Primer, ba chóir an t-imoibriú a dhéanamh ag 25 ℃ ar feadh 10 nóiméad, agus ansin ag 50 ℃ ar feadh 30 ~ 60 nóiméad;

(2) Má úsáidtear Oligo dT nó primers sonracha, ba cheart an t-imoibriú a dhéanamh ag 50 ℃ ar feadh 30 ~ 60 nóiméad.

5.Teas ag 95 ℃ ar feadh 5 nóiméad chun Neoscript Reverse Transcriptase a dhíghníomhachtú agus deireadh a chur leis an imoibriú.

6.Is féidir táirgí trascríobh droim ar ais a úsáid go díreach in imoibriú PCR agus imoibriú PCR cainníochtúil fluaraiseachta, nó a stóráil ag -20 ℃ ar feadh i bhfad.

PCR Raicsean:

1.Ullmhú an mheascáin imoibriúcháin

Nótaí:a: Má chuirtear an iomarca den chéad réiteach imoibrithe slabhra leis, féadfar an imoibriú PCR a chosc.

2.Nós Imeachta Frithghníomh PCR

Nótaí

1.Oiriúnach le haghaidh optamú teochta trascríobh droim ar ais sa raon 42 ℃ ~ 55 ℃.

2.Tá cobhsaíocht níos fearr aige, tá sé oiriúnach le haghaidh aimpliú trascríobh droim ar ais teocht ard.Ina theannta sin, tá sé fabhrach dul go héifeachtach trí réigiúin struchtúracha casta RNA.Chomh maith leis sin, éoiriúnach le haghaidh braite fluaraiseachta cainníochtúil RT-PCR ilphléacs aon-chéim.

3.Comhoiriúnacht mhaith le heinsímí aimplithe PCR éagsúla agus tá sé oiriúnach le haghaidh imoibrithe RT-PCR ard-íogaireachta.

4.Oiriúnach do fhluaraiseacht ard-íogaireacht aon-chéim imoibriú cainníochtúil RT-PCR, feabhas a chur go héifeachtach ar an ráta braite de thiúchan íseal teimpléid.

5.Oiriúnach do thógáil leabharlainne cDNA.