DNA I

Is endodeoxyribonuclease é DNase I (Déoxyribonuclease I) atá in ann DNA aonshnáithe nó dhá shnáithe a díolama.Aithníonn sé agus scoilteann sé bannaí fosfaidiester chun monai-ocsa-núicléatídí nó oligodeocsa-núicléatídí aonshnáithe nó dúbailte a tháirgeadh le grúpaí fosfáit ag an 5′-teirminéal agus hiodrocsaile ag an 3′-teirminéal.Braitheann gníomhaíocht DNase I ar Ca2+ agus is féidir í a chur i ngníomh le hiain mhiotail dhéfhiúsacha amhail Mn2+ agus Zn2+.Cosnaíonn 5mM Ca2+ an einsím ó hidrealú.I láthair Mg2+, d'fhéadfadh an einsím suíomh ar bith ar aon snáithe DNA a aithint agus a scoilt go randamach.I láthair Mn2+, is féidir na snáitheanna dúbailte DNA a aithint go comhuaineach agus a scoilteadh ag an suíomh céanna beagnach chun blúirí DNA foirceann cothrom nó blúirí DNA foirceann greamaitheach a dhéanamh le 1-2 núicléatídí ag brú amach.

Maoin Táirge

Briseán Bólachta DNase Léiríodh mé i gcóras slonn giosta agus íonaithe.

Cospaints

Iompar agus Stóráil

1. Cobhsaíocht Stórála: - 15 ℃ ~ -25 ℃ le haghaidh stórála;

Cobhsaíocht 2.Transport: Iompar faoi phacáistí oighir;

3. Ar fáil i: 10 mM Tris-HCl, 2 mM CaCl₂, gliocról 50%, pH 7.6 ag 25 ℃.

Sainmhíniú ar an Aonad

Sainmhínítear aonad amháin mar an méid einsím a dhíghrádóidh go hiomlán 1 µg de DNA pBR322 i 10 nóiméad ag 37°C.

Rialú Cáilíochta

RNase:Ní thugann 5U de DNase I le 1.6 μg MS2 RNA ar feadh 4 uair an chloig ag 37 ℃ aon díghrádú mar a chinntear le leictreafóiréis glóthach agarose.

Baictéarach Endotoxin:LAL-test, de réir eagrán na Síne Pharmacopoeia IV 2020, modh tástála teorainn glóthach, riail ghinearálta (1143).Ba cheart go mbeadh ábhar endotoxin baictéarach ≤10 EU/mg.

Treoracha le haghaidh Úsáide

1. Ullmhaigh an tuaslagán imoibrithe sa fheadán saor ó RNase de réir na gcoibhneas atá liostaithe thíos:

2.37 ℃ ar feadh 15 nóiméad;

3.Cuir an maolán foirceanta leis chun an t-imoibriú a stopadh, agus teas ag 65 ℃ ar feadh 10 nóiméad chun DNase I a dhíghníomhachtú. Is féidir an sampla a úsáid go díreach don chéad turgnamh trascríobh eile.

Nótaí

1.Úsáid 1U DNase I in aghaidh μg de RNA, nó 1U DNase I le haghaidh níos lú ná 1μg de RNA.

Ba cheart 2.EDTA a chur le tiúchan deiridh de 5 mM chun RNA a chosaint ó bheith díghrádaithe le linn díghrádaithe einsíme.