CHO HCP Kit ELISA
Úsáidtear modh aon-chéim imdhíon-ionsorbent ELISA sa mheasúnacht seo.Imoibríonn samplaí ina bhfuil CHOK1 HCP ag an am céanna le hantasubstaint frith-CHOK1 gabhair lipéadaithe HRP agus antashubstaint frith-CHOK1 atá brataithe ar phláta ELISA, agus ar deireadh cruthaítear coimpléasc ceapaire d'antasubstaint le lipéad antashubstainte-HCP-phas soladach.Is féidir antaigin-antasubstaint neamhcheangailte a bhaint trí phláta ELISA a ní.Cuirtear an tsubstráit TMB leis an tobar le haghaidh imoibriú leordhóthanach.Stoptar an fhorbairt dath tar éis an réiteach stad a chur leis, agus léitear OD nó luach ionsúcháin an réitigh imoibrithe ag 450/650nm le léitheoir microplate.Tá an luach OD nó an luach ionsúcháin comhréireach leis an ábhar HCP sa réiteach.As seo, is féidir an tiúchan HCP sa réiteach a ríomh de réir an chuair chaighdeánaigh.
Iarratas
Úsáidtear an trealamh seo chun ábhar iarmhair próitéin óstachcheall CHOK1 i samplaí a bhrath go cainníochtúil.
Cospaints
| S/N | Comhpháirt | Tiúchan | Coinníollacha Stórála |
| 1 | CHOK1 HCP Caighdeánach | 0.5 mg / ml | ≤–20 ℃ |
| 2 | Frith-CHO HCP-HRP | 0.5 mg / ml | ≤-20 ℃, a chosaint ó solas |
| 3 | TMB | NA | 2-8 ℃, a chosaint ó solas |
| 4 | 20 × PBST 0.05 % | NA | 2-8 ℃ |
| 5 | Stop réiteach | NA | RT |
| 6 | Séalaithe micreaphláta | NA | RT |
| 7 | BSA | NA | 2-8 ℃ |
| 8 | Plátaí réamh-sciath asaithe ard | NA | 2-8 ℃ |
Trealamh Riachtanach
| Ábhair Inchaite / Trealamh | Monarú | Catalóg |
| Léitheoir micreaphláta | Feistí Móilíneacha | Spectra Max M5, M5e, nó a chomhionann |
| Teirmmeascthóir | Eppendorf | Eppendorf/5355, nó a chomhionann |
| Meascthóir vortex | IKA | MS3 Digiteach, nó a chomhionann |
Stóráil agus cobhsaíocht
1.Iompar ag -25~-15°C.
2.Tá na coinníollacha stórála mar a thaispeántar i dTábla 1;stóráiltear comhpháirteanna 1-2 ≤–20°C, stóráiltear 5-6 RT,3、Stóráiltear 4、7、8 ag 2-8 ℃;is é 12 mhí an tréimhse bailíochta.
Paraiméadair táirge
1.Íogaireacht: 1ng/mL
2.Raon braite: 3- 100ng/ml
3 .Beachtas: CV laistigh den mheasúnú ≤ 10%, idir-mheasúnú CV≤ 15%
4.Clúdach HCP: >80%
5.Sainiúlacht: Tá an trealamh seo uilíoch mar go n-imoibríonn sé go sonrach le CHOK1 HCP neamhspleách ar an bpróiseas íonúcháin.
Ullmhúchán imoibrí
1.PBST 0.05%
Glac 15 ml de 20×PBST 0.05%, caolaithe in ddH2O, agus déanta suas go dtí 300 ml.
2.1.0% BSA
Glac 1g de BSA as an mbuidéal agus caolaigh i 100 ml de PBST 0.05%, measc go maith go dtí go tuaslagtha go hiomlán, agus stóráil ag 2-8°C.Tá an maolán caolaithe ullmhaithe bailí ar feadh 7 lá.Moltar a ullmhú de réir mar is gá.
3 .Tuaslagán braite 2μg/mL
Glac 48μL de 0.5 mg/mL Frith-CHO HCP-HRP agus caolaigh i 11,952μL de 1% BSA chun tiúchan deiridh de thuaslagán braite 2μg/mL a fháil.
4.QC agus Caighdeáin HCP CHOK1 a Ullmhú
| feadán Níl. | Bunaidh | Tiúchan | Toirt | 1% BSA | Imleabhar iomlán | Deiridh |
| A | Caighdeán | 0.5 mg / ml | 10 | 490 | 500 | 10,000 |
| B | A | 10,000 | 50 | 450 | 500 | 1,000 |
| S1 | B | 1. 000 | 50 | 450 | 500 | 100 |
| S2 | S1 | 100 | 300 | 100 | 400 | 75 |
| S3 | S2 | 75 | 200 | 175 | 375 | 40 |
| S4 | S3 | 40 | 150 | 350 | 500 | 12 |
| S5 | S4 | 12 | 200 | 200 | 400 | 6 |
| S6 | S5 | 6 | 200 | 200 | 400 | 3 |
| NC | NA | NA | NA | 200 | 200 | 0 |
| QC | S1 | 100 | 50 | 200 | 250 | 20 |
Tábla: Ullmhú QC agus Caighdeáin
Nós Imeachta Measúnachta
1.Ullmhaigh na himoibrithe mar a léirítear in “Ullmhúchán Imoibrí” thuas.
2.Tóg 50μL de chaighdeáin, samplaí agus QCanna (féach Tábla 3) isteach i ngach tobar, ansin cuir 100μL de thuaslagán Braite (2μg/mL);Clúdaigh pláta le sealer, agus cuir an pláta ELISA ar an teirm-mheascán.Goir ag 500rpm, 25 ± 3 ℃ ar feadh 2 uair an chloig.
3 .Inbhéartaigh an micreaphláta sa doirteal agus caith an tuaslagán brataithe.Pípéad 300μL de PBST 0.05% isteach i ngach tobar chun an pláta ELISA a nigh agus an tuaslagán a chaitheamh amach, agus an níocháin arís 3 huaire.Inbhéartaigh an pláta ar thuáille páipéir ghlan agus tirim é.
4.Cuir 100μL de TMB substráit (féach Tábla 1) le gach tobar, séalaigh an pláta ELISA, agus gor sa dorchadas ag 25 ± 3 ℃ ar feadh 15 nóiméad.
5.Pípéad 100μL de thuaslagán stad isteach i ngach tobar.
6.Déan ionsúchán a thomhas ag tonnfhad 450/650nm le léitheoir micreaphláta.
7.Anailís a dhéanamh ar shonraí trí SoftMax nó bogearraí coibhéiseacha.Breac cuar caighdeánach trí úsáid a bhaint as samhail aischéimniúcháin loighistice ceithre pharaiméadar.
Sampla Cuar Caighdeánach
TABHAIR FAOI DEARA: Má sháraíonn an tiúchan HCP sa sampla teorainn uachtarach an chuair chaighdeánaigh, ní mór é a chaolú i gceart le maolán caolaithe roimh thástáil.
NÓTAÍ
Is é an réiteach stad ná aigéad sulfarach 2M, le do thoil láimhseáil go cúramach chun splancscáileán a sheachaint!
