BspQI
Is féidir BspQI a chur in iúl go hathchuingreach in E. coli atá in ann suíomhanna sonracha a aithint agus a tháirgtear faoi
Díorthaítear BspQI, endonuclease srianadh endonuclease srian IIs, ó phéine athchuingreach E. coli a iompraíonn an gen BspQI clónáilte agus modhnaithe ó Bacillus sphaericus.Is féidir leis suíomhanna sonracha a aithint, agus is iad seo a leanas seicheamh aitheantais agus suíomhanna scoilteachta:
5' · · · · GCTCTTC(N) · · ·
3' · · · · CGAGAAG(NNNN) · · · · 5'
Gnéithe Táirge
1. Ardghníomhaíocht, díleá tapa;
2. Gníomhaíocht íseal réalta, ag cinntiú gearradh cruinn cosúil le “scalpel”;
3. Gan BSA agus saor ó bhunadh ainmhíoch;
Íogaireacht Methylation
Dam meitiolaithe:Neamhíogair;
Dmeitiliú cm:Neamhíogair;
Methylation CpG:Neamhíogair;
Coinníollacha stórála
Ba chóir an táirge a sheoladh ≤ 0 ℃;Stóráil ag -25 ~ - 15 ℃ riocht.
Maolán stórála
20mM Tris-HCl, 0.1mM EDTA, 500 mM KCl, 1.0 mM dithiotreitol, 500 µg/ml Albam Athchuingreach, 0. 1% Trition X- 100 agus 50% gliocról (pH 7.0 @ 25°C).
Sainmhíniú ar an Aonad
Sainmhínítear aonad amháin mar an méid einsím a theastaíonn chun 1µg de DNA rialaithe inmheánaigh a dhíleá in 1 uair ag 50°C i dtoirt imoibrithe iomlán 50 µL.
Rialú Cáilíochta
Measúnacht Íonachta Próitéin (SDS-PAGE):Ba é íonacht BspQI ná ≥95% arna chinneadh ag anailís SDS-PAGE.
RNase:Ní thugann 10U de BspQI le 1.6μg MS2 RNA ar feadh 4 uair an chloig ag 50 ℃ aon díghrádú mar a chinntear le leictreafóiréis glóthach agarose.
Gníomhaíocht DNase Neamh-Shonrach:Ní thugann 10U de BspQI le 1μg λ DNA ag 50 ℃ ar feadh 16 uair an chloig, i gcomparáid le 50 ℃ ar feadh 1 uair an chloig, aon DNA breise mar a chinntear le leictreafóiréis glóthach agarose.
Ligation agus Recutting:Tar éis díleá 1 μg λDNA le 10U BspQI, is féidir blúirí DNA a ligáil le ligáis DNA T4 ag 16ºC.Agus is féidir na blúirí ligated seo a athghéarú le BspQI.
E. coli DNA: Léirigh braite TaqMan qPCR E. coli 16s a bhain go sonrach le rDNA go raibh iarmhar géanóim E.coli ≤ 0.1pg/ul.
Iarmhar próitéine óstach:≤ 50 ppm
Baictéarach Endotoxin: LAL-test, de réir eagrán na Síne Pharmacopoeia IV 2020, modh tástála teorainn glóthach, riail ghinearálta (1143).Ba cheart go mbeadh ábhar endotoxin baictéarach ≤10 EU/mg.
Córas imoibrithe agus coinníollacha
| Comhpháirt | Toirt |
| BspQ I(10 U/μL) | 1 μL |
| DNA | 1 µg |
| 10 x BspQ I Maolán | 5 μL |
| dd H2O | Suas le 50 μL |
Coinníollacha imoibrithe: 50 ℃, 1 ~ 16 h.
Díghníomhú teasa: 80 ° C ar feadh 20 nóiméad.
Is féidir leis an gcóras agus na coinníollacha imoibrithe molta éifeacht díleá einsímí réasúnta maith a sholáthar, atá le haghaidh tagartha amháin, féach le do thoil ar thorthaí an turgnaimh le haghaidh sonraí.
Feidhmchlár táirge
Srian díleá endonuclease, Clónáil Mear.
Nótaí
1. Toirt na heinsíme ≤ 1/10 den toirt imoibrithe.
2. Féadfaidh gníomhaíocht réalta tarlú nuair a bhíonn tiúchan gliocról níos mó ná 5%.
3. Féadfaidh gníomhaíocht scoilteadh tarlú nuair a bheidh Foshraith faoi bhun an chóimheas molta.
